复方苦参注射液(岩舒注射液)对大肠癌细胞凋亡的实验的研究.pdfVIP

良春名医学术论坛 第二届中国中医药发展大会 复方苦参注射液(岩舒注射液)对大肠癌细胞凋亡 的实验研究 广东医学院附属医院 康 旭 冼沛中 许庆文 “岩舒”复方苦参注射液是纯中药抗肿瘤制 生长期加入70Ug·Lq的药物作用24h后常规方 剂。该药由苦参、白茯苓等中药精制而成。该药在 法收集细胞，用于冷的PBS洗涤2次，加入 用于临床治疗癌症的过程中被发现具有良好的 抑制肿瘤的作用，可有效地缩小或稳定瘤体，并改 善疼痛、发热、出血、乏力等临床不适。本研究主 液，终浓度为10Ug-L～，冰上染色15min。离心去上 要观察该药在体外对大肠癌LoVo细胞生长的影清。制片，荧光显微镜观察，拍照。 响。 琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡的检测 将培 材料与方法 养细胞消化、离心、转移到1．5mLeppendof管，加 主要试剂 细胞裂解液500uL混匀，置370(2水浴箱过夜，以等 R．PMll640培养液(GIBCO产 品)，使用前加10％新生牛血清(杭州四季青产品)。体积苯酚抽提，加1／10体积3mol·L-1醋酸钠，2 倍体积冰无水乙醇沉淀DNA，置-20。(2，过夜，再以 MTT，DMS0，碘化丙啶、Hoechest33342(sigma公 司)。AO／EB染料：精确称取AO(Fluka产品)、EB (Huka产品)各lmg，分别溶于10mLpH7．2PBS中 使之配成100ug．mLl的储备液，用前等量混合，备 用。复方苦参注射液(岩舒注射液)由山西金晶药 外灯下观察，并拍照。 业有限公司生产。LoVo细胞购自中国科学院上 结果 海细胞生物所。1．2细胞培养LoVo细胞培养于 复方苦参注射液对LoVo细胞的生长抑制作 用 台盼蓝实验表明，复方苦参注射液可抑制 含10％／Jx牛血清，100U．mLq青霉素和100ug．mLq LoVo细胞的生长，其抑制作用成时间与剂量依赖 链霉素的R．PMl21640培养液中，370(2，5％C02饱 和湿度孵箱培养，取对数生长期细胞用于实验。 关系(表1)。 台盼蓝染色法对细胞计数 取对数生长期 表1复方苦参注射液对LoYo细胞的生长抑制作用(T±s，n=3) 细胞用0．25％胰酶一0．01％。CDTA消化后，计数将 浓度／Ug·L—l24hiR／％ 48hIR／*i 72hiR／％ 对照0 0 0 2x104细胞接种于24孔培养板内(2mL／；J：L)。每3 10 1．3 4．3 8．0 个平行孔为一组，按倍比稀释的原则设定各组药 40 12．8 26．4 42．2 70 36．5 57．6 86．5 物的浓度，常规培养24，48，72h后搜集细胞，加入 等体积0．2％台盼蓝染液，在普通光镜下用血球计 数板计数，胞体蓝染的细胞为死细胞，计数存活细 细胞凋亡的形态学观察 经Hoechst一 胞数，每个样品计数2次，根据3次实验结果求平 33342一PI染色的细胞相对照组细胞核大小较均 一，呈圆