生脉注射液抗PC12细胞氧化损伤的实验的研究.pdfVIP

2004年10月第24卷 湖南中医学院 学报 Oct．2004VoI．24Sl ofTCMUniv．ofHtman 129 Journal 1 生脉注射液抗PC2细胞氧化损伤的实验研究 王蕾1，小西徽也2 (1．首都医科大学中医药学院，北京100013；2．新泻药科大学，日本新泻。950-20s1) 【摘要】目的研究生脉注射液对H202诱导的1：4312细胞氧化损伤的影响。方法生脉注射液与神经细 DNA单链损伤。结果H202处理后细胞内羰基蛋白含量及DNA单链损伤明显升高，并呈浓度依赖关系。而 经生脉注射液预培养的细胞内羰基蛋白含量及DNA单链损伤明显减轻，并与其浓度有关。同时，采用MTr 法测定细胞的生存率，生脉注射液预培养组与对照组相比，生存率明显升高。结论生脉注射液能够降低 H202对PCI2细胞内蛋白和DNA的损伤，具有抗氧化作用。 【关键词】生脉注射液；氧化损伤；羰基蛋白；DNA损伤；PCI2细胞 w_M 生脉注射液为金代李东垣《内外伤辨惑论)中生脉散(人 细胞处理后与10 DNPH(溶于2NI-ICl)在室温反应lh。蛋 参、麦冬、五味子)的高效提取物，已广泛用于心血管系统疾 白用7％三氯乙酸(Ⅱ认)沉淀后用BCA法测定蛋白(以lISA 病的治疗n’2】。近年来也用本剂治疗脑及神经的病变，如脑 作蛋白标准)饽】。用于ELISA的标准曲线由氧化的BSA与未 梗塞、脑出血、老年痴呆等病H。J。大量报道证明氧化应激 氧化的lISA按一定比例混合(0％，40％)测定。检测样本与 具有神经毒性，并参与了脑及神经的病变。研究证实生脉注 标准均每孔100止加到96孔酶标板中4℃过夜。用含0．1％ 射液有清除体内氧自由基、抗脂质过氧化及保护神经细胞等 重要作用哺】。这可能是其发挥作用的机理之一。为了进一步 PBsr)，室温放置2h，样本用一抗(小鼠IgE抗一DNP抗体)37 了解其保护脑氧化损伤的机理，本研究以H202诱导PCI2细 ℃放置4h，用PBST冲洗后加入二抗(酶标抗体)37℃放置1 胞(神经细胞模型)氧化损伤来探讨生脉注射液的保护作用。 h，加入TMB酶底物溶液反应3min，最后用0．18M的硫酸终 I∞dd 止反应。用酶标仪(Bio-Rad550)450nm读取数据。 1材料和方法 2．2慧星法(亦称单个细胞凝胶电泳法) 1．1主要试剂 此法是用慧星法试剂盒快速检测DIqA损伤的一种特殊 DMEM细胞培养基和胎牛血清均购于美国Sigma公司， 方法。细胞悬浮液(1×10／mL)与低溶点琼脂糖混合后直接 青链霉素购于美国Gibeo公司。MTr购于日本Dojindo公司，加到载玻片上。4℃放置10win，然后将载玻片浸入裂解液 小鼠I疵抗DNP单克隆抗体购于美国Siena公司，与辣根过 中，4℃放置60rain。再将载玻片浸入新鲜配制的碱性裂解 氧化物酶偶联的大鼠抗小鼠螂抗体购于美国SBA公司。 液中，室温放置20rain。用l×TBE缓冲液冲洗2次，每次5 TMB酶底物购于美国Bio-Rad公司。慧星法试剂盒购于美国 min。将载玻片放入电泳槽中。用相同的缓冲液电泳10min， Trevigen公司。生脉注射液由中国雅安三九药业有限公司提电压为l V／era。完毕后将载玻片浸入酒精中5rain