替米沙坦对大鼠血管损伤性重塑过程中粘着斑激酶表达与活化的影响.pdfVIP

基础研究 2007海河之滨心脏病学文章汇编 替粕鳓瞅鼬血1勤黜稚睡遴越程中j晦箭弼烟珐哒和活似黝 鲍翠玉1，程芳洲。2△，柯俊3 1咸宁学隐b#n管病研究所2深圳市慢性病防治院 3武汉市华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科 [摘要】 目的：研究血管紧张素受体拮抗剂替米沙坦对血管损伤性重塑及此过程中粘着 斑激酶表达、活化的影响。方法：建立大鼠主动脉内皮剥脱术后再狭窄模型，将雄性大鼠随 机分为3组(n=12)：对照组、模型组、替米沙坦治疗组。30天后取损伤部位血管段进行形态 blot法测定FAK的蛋白总 学观察及提取RNA和蛋白质，RT—PCR测定FAK的mRNA表达、Western 量和磷酸化蛋白含量。结果：术后30天，模型组主动脉内膜明显增厚，FAKmRNA水平明显增 高，蛋白含量及磷酸化水平均明显增加(yes对照组)，而替米沙坦治疗组血管内膜增生程 mRNA表达活性明显降低，FAK蛋白含量及磷酸化水平明显降低(yes模型 度明显减轻，FAK 组)。结论：替米沙坦可明显减轻大鼠血管内膜剥脱术后血管内膜增生程度，抑制血管损伤 后FAK表达与活化。替米沙坦的抗血管损伤性重塑作用可能与抑制FAK表达与活化有关。 关键词：替米沙坦粘着斑激酶内皮剥脱术血管重塑 smoothmuscle 有研究表明，血管内皮损伤后，往往伴有血管平滑肌细胞(vascular racellular cell，VSMc)的粘附迁移、增殖及细胞外基质(extmatrix，ECM)的大量合成 和重构，这是血管成形术后发生重塑导致再狭窄发生过程中的一个重要环节Ⅲ。而在此过程 adhesion 中常伴有粘着斑激酶(focal kinase，FAK)的表达和磷酸化激活唧。也有实验证 明血管紧张素(Ang)参与了血管损伤性重塑过程口1，那么血管紧张素受体拮抗剂替米沙坦对 血管损伤性重塑有何影响以及对此过程中粘着斑激酶表达和活化有何影响?本文对此探讨， 以了解替米沙坦在防止血管再狭窄中的作用及相关机制．4 材料与方法 1．动物及主要试剂：Wistar大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。兔抗鼠FAK 多克隆抗体、羊抗小鼠PY-99抗体和ECL试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。TaqManGold RT-PCR Kit为美国PE公司产品，FAK引物由上海生工生物工程公司合成。替米沙坦(美卡 ．素)德国勃林格殷格翰公司生产。 2．血管内皮剥脱术后再狭窄动物模型的建立：取体重300～3609的雄性Wistar大鼠，将动 物随机分为3组(n=12)：对照组、模型组、替米沙坦治疗组。模型组、替米沙坦治疗组大 鼠以球囊导管法剥脱血管内皮。对照组及模型组正常迸食及饮水，治疗组在进食同时给予 替米沙坦药液5mg／kg．d。连续给予药液30天，随即取损伤部位血管段进行形态学观察及提取 RNA和蛋白质。 3．观察血管壁增生程度+石腊组织切片脏染色。光镜下计算机图像分析系统测量大鼠损 伤动脉段外弹力板围绕面积及腔内面积。管壁面积按外弹力板围绕面积减去腔内面积计算。 4． RT_PCR测定FAK的mRNA表达：引物由上海生工生物工程有限公司合成，FAK上游扩增 GGCr-从ATCGTGCG-3’，下游扩 增引物产物长度为833bp，Bactin上游扩增引物5’-AGCTGAGA 仿一步法从上述各组动物的血管中提取总P．NA作逆转录。然后用PaR扩增仪进行PCR反应。 应。1．2％琼脂糖电泳，电泳结束后凝胶置凝胶成像系统中扫描图像入计算机中保存处理。 42 2007海河之滨心脏病学文章汇编 基础研究 5． Western