蒜酶催化蒜氨酸反应产物LC%2fMS分析.pdfVIP

蒜酶催化蒜氨酸反应产物的LC／MS分析 影军民1，向阳2，王岩1，陈坚1(1．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐830。54；2．新疆医科大学一附院检验科。乌鲁术齐83∞∞) 近代研究发现，大蒜具有抗癌、降血脂、杀灭真 菌等作用。成为各国研究热点”…。目前公认蒜酶催 化蒜氨酸产生大蒜辣索及其台硫化台物是大蒜的主 要有效成分。分别提取蒜氨酸和蒜酶，可望研制成 一类高效新药，因此研究蒜酶催化蒜氨酸反应产物， 为研究大蒜辣素的定量及动力学分析提供依据。 l材料与方法 1．1 HPll00 仪器 Agilent LC／MsD系统，含在线 真空脱气机。二元高压梯度泵，手动进样器，恒温柱 ，，m 箱，VwD紫外检测器及质谱检测器(配有大气压化圈l蒜酶催化蒜氨酸色谱图 学电离源和电喷雾离子源)。HP化学工作站。微 !： ODs一1(5 量移液器；旋涡混台器；Kroma3jl p瑚，4．6 Illnl×2sOⅡm)。 1．2药品与试剂 对照晶蒜氨酸，本实验室自制；蒜酶。本实验室 自制；丙酮酸，分析纯，相对分子质量88(上海曹杨 化工厂)；甲醇，分析纯；水为高纯水。 r 1．3液相色谱和质谱条件 mm×250 色谱柱：K咖曲il0DS-l(4．6 mm，5 舻． 州竹粕州 W 岬1)；柱温：35℃；流动相：甲醇：水(2：3)；流速：O，5 mL·min～；检测波长：214nm。离子化方式EsI (+)及EsI(～)．扫描范围50之50砒，干燥气流 速：10L·而n一。温度：350℃，雾化气压：2．07×105 000 V。 Pa，毛细管电压：3 V，碎片电压：60 1．4 祥品处理 “㈣4 按蒜氨酸：蒜酶(1：2)准确称取一定量的蒜氨 酸和蒜酶，加一定体积的水，使蒜氨酸的浓度为l ’习 f ； miII，取1mL加甲醇1．5 g·L～。35℃水浴反应10 mL涡旋混合lmin，O．45斗m滤膜过滤，取10止进 样分析。 争。卜。hL止一I卜． 2结果与讨论 2．1液相色谱和质谱总离子流程图 蒜氨酸+蒜酶反应液进样分析，得到紫外色谱 图(图1)及质谱总离子流程图(图2)。 2．2反应物的鉴别 从上述反应产物的色谱图及质谱离子流程图可 看出，有3个主要的峰，按“1．3”项下质谱条件要求 操作，得到3个质谱图。 min的峰，在EsI(+)下得到质谱图 ￡。=3．336 Ⅵ 战 ，- Ⅳ4 日 斗 M矿＼／8、／、cooH 。，小A。。]：。只。。]： jJJjJJJ，●]1，●{{●|JJJJJ^ on∞，。，●．．。，。．．，．．。．．．．．．．●■1 一一 P．}一 眦 t、 2 ，，- 圈4丙酮酿在Esl(一)下的质谱圉 c《≮辫。，啦 由于一级质谱能量低，不能对大蒜辣素进行裂 解，故在质谱图中看不到