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原位杂交技术在肛周、女阴HPV感染中的应用 南京中医药人学附属医院 徐州市中医院 王旭波 1、此题目为江苏省卫生厅课题 2、立项依据 研究背景、研究现状与进展： (1)HPV感染与宫颈癌和尖锐湿疣的关系 (2)原位杂交技术的原理与病理学应用 (3)肛周、外阴、宫颈HPV感染患者增多 (4)HPV感染不仅需要组织形态学诊断 更需要病源学(病因)的诊断 (5)如何才能早期发现、早期诊断、 早期干预、早期治疗 课题研究概要 研究目的：应用原位杂交技术(ISH)对HPV感染者进行分子水平的病源体(病因)诊断 研究方法：应用生物分子标记过的DNA探针通过杂交在组织切片和细胞涂片上检测和定位 HPV特定的把DNA或RNA 客观、可靠 研究结论：疾病应从病理组织学水平诊断过度到分子生物学水平诊断 应从疾病的形态学诊断上升到疾病的病冈学诊断 一、流行病学状况 1、宫颈癌是仅次丁乳腺癌占女性恶性肿瘤的 第二位，某些地区甚至占第一位，全世界 每年新发病例约50万人次。80％的病例发生在发展中国家，中国为高发病国家。 2、尖锐湿疣等性传播性疾病发病率增高，近年米中国早明显上升趋势，已引起重视。 3、 2004年国际癌症研究中心对HPV感染与宫颈癌的关系做出了定论： (1)、HPV感染是宫颈鳞状上皮内瘤变(CIN)和鳞状细胞癌发生的主要原冈。 (2)、持续的HPV感染是女性宫颈癌发生的必要冈素。 (3)、高危型HPVDNA检测是宫颈癌筛查和随访行之有效的手段。 二、HPV感染与宫颈癌、尖锐湿疣 1，HPV(人乳头瘤病毒)的分犁与疾病：． 现已发现200多个哑型按照与宫颈癌发生关系的相关程度分为： 52、56、58、59、68、73、82．(主 ({，)、高危型：16、18、3l、‘33、35、39、45、51、 ) 要是16、18型，是宫颈CIN和鳞状细胞癌发生的主要原因。 (2)、可能高危型：26、53、66 (3)、低危型： 主要原冈)。 三、HPV感染的特点 l、嗜上皮嗜粘膜性，尤其是嗜鳞状上皮，对富颈鳞一柱上皮更敏感，除可感染宫颁上皮 外，还可感染肛周、外阴、男性外生殖器、口咽、喉和胃肠道。 14I 2、免疫逃逸性：HPV感染一般不引起强烈的免疫反应．不伴随炎症。免痤抑制状态的忠 者易感HPV(如HIV和器官移植患者)。 三、HPV感染的特点 3、HPV感染鳞状r皮后．在终末分化的鳞状r皮细胞内不断分裂、繁殖井释放传染性 病毒颗粒；然而，HPV也可以保持长时间休眠状态。 4、表皮损伤是HPV感染的重要外在环节。 5、HPV首先进入鳞状上皮的基底层并寄牛、整合，感染后的基底细胞增生达到表层时 HPV进行复制．因此，ISH在表层可榆测到大鼍复制的HPv。 6、liPV结构与特征： HPV由桉酸和衣壳蛋白组成，病毒颗粒脱壳后即为核酸．核酸进^宿主细胞，细胞内只 有核酸(或DNA片段)，而找不到病毒颗粒(衣壳上的抗原)，称为聪蔽期．此期免疫组化 DNA 无法标记到HPV病毒颗粒。而原位杂交技术足测核酸．因此，此期仍可标记到HPV 的存在。 四、HPv感染与宫颈癌的发生 HPV感染后病理学上的演变可以表现为： 尖锐湿疣一CINI—CINⅡ一CINllI一原位癌一早期浸润癌一宫颈浸 润癌。 应当建立一个这样的概念：肿瘤的发牛是一个缓慢的渐进过程，绝小可能一夜之间 由正常演变成癌。从感染HPV至发生宫颈癌．大约需要lO一20年，晡在宫壬页浸润癌之前任 意时期及时