斑蝥素和去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究.pdfVIP

剂，故丹参素释药速度小于后者。微粉硅胶亲水性强，用量大时可增加片剂的亲水性，有利于水分透入片剂， 促使丹参素释放加快。 3．2．5粒径和压力对释药速度的影响EC20cp粒径是控制丹参素释放的重要因素。压力相同时，随着粒 径减小，粉末理论接触点数增加，粒子间的结合力增强，孔隙率降低，故使片剂硬度提高，丹参素释药速度加 学药EC骨架片中药物释放行为不同，原因有待于进一步研究。粒径为140--180目时，丹参素释放速度随 压力增大而减小，原因可能是压力增大，片剂孔隙率变小，孔弯曲率增长所致。 4小结 采用直接压片法制备的丹参提取物EC骨架片在12h内具有较好的缓释作用。EC的粘度越低，压缩成 型性越好，片剂的硬度越大，指标成分丹参素释放速度越慢。片剂载药量增加，其硬度提高，释药速度加快。 在常规用量下。硬脂酸镁和微粉硅胶对片剂硬度和释药速度无明显影响。海藻酸钠和西黄耆胶可加快片剂 扩散逐渐向扩散和溶蚀二者协同作用转变。(参考文献略) 斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究。 孙震晓马清温阎华超赵庆嬖程霜郭善刺 (山东聊城师范学院生物系重点实验室，聊城，252059) 抗肿瘤活性。临床上，CA能够缓解原发性肝癌患者病情，提高一年生存率。动物实验表明，CA可以刺激骨 床应用CA有强烈的泌尿系刺激作用，使患者难以坚持治疗。而且由于CA产生泌尿系刺激剂量低于其升 加成、氢化而得，与CA相比，缺少1，2位的两个甲基，立体构型相同，其毒性显著降低，小鼠急性t／k(ip)为 12．5mg／kg。I临床应用NCTD治疗多种消化道肿瘤，以原发性肝癌为主，毒副作用大大降低，升自效果显著。 我们在实验中发现斑蝥素及去甲斑蝥素均能诱导人肝癌BEL一7402细胞凋亡，进一步研究这一现象，对揭 示去甲斑蝥素的抗癌机制及指导其临床应用等有重要意义。 1材料与方法 1．1细胞系及培养条件 药均在细胞对数生长期内进行。 1．2药品与试剂 CA用丙酮自南方大斑蝥(N母labris 丁烯二酸酐经加成、氢化得到，北京第四制药厂王广生教授惠赠。丽药均在RPMI一1640内溶解，抽滤灭 菌，一20C保存。RNaseA和Proteinase p-40(NP一40)：F1uka产品。 rnl～，一20℃存放。Nonidet 1．3剂量反应曲线 。山东省教委项目(j99rm4)，山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(No．9921)贷助。 173 ■—■丁…～了■蔼蕊圈函蕊嬲一一I 培养液，生理盐水洗3次，每孔加入NAG酶反应底物保存液50出，37C继续孵育4h后，每孔再加入踟ⅡI酶 的培养孔的平均OD值对药物浓度作图，实验重复3次。 1．4细胞DNA片断的提取及琼脂糖凝胶电泳 参照文献收集DNA片段，在1．0％的琼脂糖凝胶上电泳，恒压33V；紫外透射仪上观察并摄影。 1，5细胞形态学观察 1．5．1一般形态学观察收集适量细胞，离心涂片，风干固定。贴壁细胞，直接倒掉培养液，取出细胞附着 的盖片，PBS洗。单层细胞标本以Wr／ght—G／emsa染色，光镜下观察。 5．2超微结构观察 细胞经常规2．5％戊二醛与1％锇酸固定后，逐级浓度酒精脱水，SouryResin树脂包埋，超薄切片，枸橼 酸铅一醋酸双氧铀电子染色，JEM一1200EX透射电镜观察。 1．6免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达 常规SABC法测定。用PIP(过碘酸盐一赖氨酸一多聚甲醛)固定液固定细胞，I抗为兔抗人Bcl一2 laboratories，Inc．，1 ：200)，室温30rain，滴加辣根酶标记链霉亲和素(Vector 细胞测定其平均光密度，结果用t检验统计分析。 1．7 Western blotting分析 2×点样缓冲液，沸水中煮10rain，使细胞裂解，每个点样孔加 离心收集细胞约5×106个，加入t00tzl 25m样品液，12．5％的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。凝胶上的蛋白带转移到硝酸纤维素膜上，封 闭液封闭膜上的免疫球蛋白结合位点，过夜。加入特异性的I抗(兔抗B