PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球的制备和粘膜免疫应答研究.pdfVIP

时间，提高了药物在胃部的局部浓度。 3讨论 本文作者按照文献上甲硝唑在人血浆、血清和粪便中浓度的HPLC测定法，无法将SD大鼠胃组织的一 个内源性杂质峰与甲硝唑峰分开。胃组织蛋白沉淀剂曾试验了无水乙醇、丙酮、5％高氯酸、乙腈和甲醇等， 结果表明采用甲醇一h((15：85)为流动相，只有以甲醇为胃组织蛋白沉淀剂才能将内源性杂质峰与甲硝唑峰 分开。(参考文献略) PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球的制备及粘膜免疫应答研究 往建敏王缚照邹全明 曾蟀锟(第三军医大学医学检验系西安400038) 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hv)是导致B型胃炎、消化性溃疡以及与胃牯膜相关的胃淋巴系统疾病 产生的主要诱因。因Hp较易再次感染且耐药菌株不断增多，针对Hp感染的病人现多采用抗生索三联治疗 法，但治愈率不高且不能预防H晒再次感染。rip1：1服疫苗方便、安全，能有效诱使}Ip感染的粘膜免疫，现已 成为许多研究昔追逐的热点。以可生物降解、生物相容性好的高分子材料包裹抗愿制作微球疫苗，具有接种 简单、保护抗原、靶向投递、佐剂活性等优点，口服免疫后，能引起系统和局部免疫。聚乳酸(PLA)及聚乳酸 与聚乙醇酸共聚物(PLGA)是目前在生物医学工程中应用最多的生物降解材料，但疏水性强、生物相容性 差，降解终产物乳酸、乙醇酸对生物体产生酸性微环境，其疫苗教球容易被网状上皮系统的吞噬细胞俘获，在 生物体内存在的半衰期短。若聚乳酸中引八亲水性的聚乙二醇，形成A—B—A型聚醚类嵌段共聚物 (PELA)，可明显改善PLA或PLGA存在的弊端。 本研究采用Hp全菌超声上清经PELA包裹后制备}币口服疫苗微球，口服免疫小鼠，分别以 secreting ELISPOT、ELISA法检测了PP结抗体形成细胞(antibody sle,A，分析口服免疫后小鼠的粘膜免疫状况，为研制高效Hp疫苗提供理论依据。 l实验仪酱殛材料 Leitz、Wild h伊s52照相设备(德 M1：$46、Photoaummay、Wild 1．1仪器LeitzI)iaplan一光学显微镜wild 国)。Amray型扫描电子显微镜。wL一2激光粒度分析仪，TV显微系统(重庆大学光电学院研制)，可见／紫 干燥器(国产)，低温冷冻真空干燥器(国产)。 只随机分为5组，分别为Hp超声上清免疫组(Ag组)、徽球包裹}如超声上清一次免疫组(M1组)、搬球包裹 Hp超声上清两次免疫组(M2组)、不包裹抗原空微球组(MO组)、PBS对照组。 1．3菌苗株Hp971023、Hp980706、HpM由本室分离保存。 它试剂为国产分折纯。 2实验方法 2．2 726 } — 一r 尽后，微球固化离心收集，双蒸水洗涤5～6次，低温真空干燥，贮存备用。 2．3 净水替代抗原蛋白的水溶液)。 2．4造影微球的制备将一定浓度的泛影葡胺(造影剂)替代1．6复乳法制教球的w内，后同疫苗微球的制 备步骤。 2．5微球特性检测微球的表面形态用AMRAY型扫描电子显微镜照相观察；粒径分布用wL一2激光粒 度分析仪测定；疫苗微球蛋白含量与包裹率测定参照文献方法。 2．6微球在体内的靶向分布造影微球悬液经管饲法灌人小型猪胃内，在第3，5，8d后应用计算机x射线 断层造影仪(CT)活体观察显影微球在胃肠道的分布。8d后处死，将整个胃肠洗净，用水填充后置于塑料容 器中，用计算机x射线断层造影仪照片，观察在整个胃肠道的分布。 次，M2组、M0组在O，7，14，21d各免疫一次，方法除不中和胃酸外与前两组相同。 2．8小肠和胃粘膜淋巴细胞ASC检测参照文献方法进行。 2．9 ELISA法测定小鼠小肠粘液、唾液sie,A变化参照文献方法进行。 2．10统计学处理将各组测定值计算均数、标准差，进行显著性检验(t检验)。 3实验结果 3