人巨细胞病毒地方分离株的鉴定及其UL83序列分析.pdfVIP

2006 ·612· UniversitatisMedicinalisAnhui 安徽医科大学学报Acta Dec；41(6) 人巨细胞病毒地方分离株的鉴定及其UL83序列分析 史永林，陈敬贤，王明丽 摘要 目的鉴定从合肥市某医院先天性脑瘫患儿尿标本 中分离的4株人巨细胞病毒(HCMV)毒株并对其UL83基因 序列测定和分析。以期了解先天性脑瘫患儿中感染 序列进行分析，为HCMV感染的预防及p065蛋白疫苗的研 的HCMVUL83区段的基因突变情况，为今后HC— 制提供参考依据。方法应用细胞培养法复苏病毒，间接免 MV感染的流行病学调查、预防和pp65疫苗的研制 疫荧光法检测pp65蛋白表达，并用特异性引物对UL83基因 以及完善我国疱疹病毒信息数据库与疱疹病毒预防 进行PCR，扩增的产物经凝胶纯化后测序；序列结果运用 控制工作等方面提供了理论参考依据和研究平台。 DNAMAN软件和GenBank登录的3株代表性HCMV毒株进 行核苷酸和氨基酸序列比对。结果HCMVADl69株与1材料与方法 HCMV．1分离株的UL83基因核苷酸及编码氨基酸序列的同 1．1地方分离株与病毒地方分离株编号分别为 源性均为100％，与其余3株的同源性也达99．26％～ 99．69％；4株HCMV分离株与Merlin株、Towne株在相应基 因片段核苷酸及氨基酸的同源性最低的分别为98．95％， 99．06％。结论UL83序列分析结果表明，HCMVUL83编到后置液氮保存；标准毒株HCMVADl69株由复旦 码p065蛋白的优势抗原决定簇氨基酸序列无变化。 大学上海医学院微生物学教研室惠赠，由本室长期 主题词巨细胞病毒／分离和提纯；生物学鉴定法／方法；序 传代保存。 列分析，DNA 1．2细胞及试剂HF细胞株参考文献[7]制备； 394-3 中图分类号R373．9；R TaKaRa GelDNAPurificationKit．DL2000 Agarose 文献标识码A文章编号1000—1492(2006)06—0612—05 DNA聚 Marker购自TaKaRa大连宝生物公司；Taq 人巨细胞病毒(HCMV)属B疱疹病毒亚科， HCMV 双链、线性DNA病毒。病毒体中的大部分蛋白质位 NovocastraLaboratories 于包膜与衣壳问的皮层中，多数为磷酸化蛋白。其 Pro— 购自武汉博士德公司。荧光显微镜和Image 中由UL83基因编码的pp65蛋白，为HCMV主要的 and cessing 被膜磷蛋白