人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测.pdfVIP

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2017-08-14 发布于江西
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人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测.pdf

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人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测.pdf

士第27卷第3期生物学杂 J卧 VoL27 No．3 2010年6月 OFBIOLOGY JOURNAL Jun，2010 辫强穗辫氍器辫琶瓣辫飘：飘：飘：飘：飘：强辫爨疆辫辫疆辫辫疆强疆瓣辫疆强氍i氍i氍i氍i氍i氍i氍豫漆氍瓣漆氍鞭爨氍冁b doi：10．3969／j．issn．1008—9632．2010．03．020 人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测刘建玲1，康雪莲1，董辉2，王嘉颖3，曹琳3，徐晓晶3，金维荣3 1 1 (1．西北大学生命科学学院，西安7 0069；2．国家人类基因组南方研究中心，上海20203； 3．上海华冠生物芯片有限公司，上海201 203) 摘泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达，通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET一22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件，获得可溶性表达的目的蛋白，纯化后纯度达90％，westernblot表明其具有His标签 11 为25U／mg。关键词：分泌磷蛋白2；基因克隆；原核表达；纯化；生物活性中图分类号：Q785；Q786 文献标识码：A nl - l ·● ■ n 一· 一一 ofrecombinanthumansecreted I∑10ning，proRaryoticexpresslon 2andits determination phosphoprotein activity LIU Jian—lin91，KANGXue．1ianl，DONG Hui2，WANGJia—yin93，CAOLin3， XU Xiao-jin93，JIN Wei—ron93 ofLifeSciencesofNorthwest 7 an1 (1．College 7 NationalHumanGenomeCenterat University，Xi0069；2．Chinese 201 201 Shanghai，Shanghai 203；3．ShanghaiHuaguanBiochip 203，China) Company，Shanghai Abstract：The themature ofhumanSPP2wasobtained targetgene