H7N2禽流感病毒分离株的研究%3aⅣ.禽流感病毒CK%2fHB%2f1%2f02神经氨酸酶全基因序列分析.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 亚型AIV。在遗传进化关系上，AIVH7亚型与H9和风分离株分属不同的进化路径。 2．6．2 H7亚型流感病毒HA基因系统发育进化树 该分离株在}17亚型流感病毒的HA基因进化树中(见图6略)，位于欧亚群系的分支上，而与北美群 rJEng—Q／938／79(HvNI)共同组成一个相对独立的分支，区分于其它欧亚分支。 3讨论 H7亚型的欧亚群系分枝的末端，与国内近几年的H5、H9亚型的毒株差异显著，可以从HA基因特性上验 意大利H7N2 低，这表明该分离株的HA基因可能源于欧亚群系H7亚型禽流感病毒。 3．2近年来，H7N2亚型AI曾在美国流行，与此同时，美国禽类产品(尤其是内脏和爪)以各种渠道 流八我国部分地区，次此国内发现的H7N2亚型AIV是否与此有关，也是许多人关心的问题。从研究结果 看，这藕个分离株HA基因与美国毒株同源性很低(约为65％)，可以排除这种可能。 3．3HA裂解位点的氨基酸序列是决定AIV毒力的关键因素，研究表明，大多数高致病力禽流感毒株， 在其HA裂解位点附近有多个碱性氨基酸，因而可被机体细胞内多种蛋白酶所识别和裂解”J，因此，高致 病力毒株在宿主体内有泛嗜性。低致病力AIV毒株，在其裂解位点附近缺乏碱性氨基酸，其HA只能被宿 主细胞内有限的蛋白酶所识别，所以只引起消化道或呼吸道的局部感染。本研究的结果表明，两个分离株 在裂解位点处缺少3个碱性氨基酸，符合低致病力禽流感裂解位点的基因特征，潜在致病力较低，这与 参考文献略 酶全基因序列分析 王传彬孙明王宏传遇秀玲陈西钊田克恭 (农业部兽医诊断中心，北京100094) 行了分析。采用针对AIV 与GenBankrOAIV HA基因序列进行了同源性比较和氨基酸编码分析，并绘制了NA基因的系统发育进化树 NA蛋白。该病毒NA基因的核苷酸序列与GenBallk中人类流感病毒A／Leningrad／134／57(H2N2)的NA基因 同塬性最高，为93．7％；其次为香港的鸭源、人源、猪源H斟2病毒(约为89％～93％)；而与广东、北京、 香港、韩国的HgN2AⅣ以及美国的H7N2 同分支，遗传距离较远。 关键词禽流感病毒，珥N2亚型，分离鉴定，NA基因 571 家禽传染病 神经氨酸酶(NA)是A型流感病毒囊膜上两种糖蛋白纤突之一，与HA共同组成A型流感病毒亚型的特 异性抗原，也是一种重要的保护性抗原。对NA基因的分析，可以进一步验证禽流感病毒分离株的神经氨 酸酶亚型，了解分离株NA基因与其它毒株之间的关系。 是否有联系?这些问题均有待进～步研究。 本文将在前期分离鉴定H7N2禽流感病毒的基础上，测定分离株NA基因的核苷酸序列，推导其氨基酸 序列，比较分离株NA基因与其它A1V毒株的同源性及遗传关系。 1材料与方法 1．1病毒 1．2分子生物学试荆 RNA提取试剂盒、反转录及PCR试剂等均为Promega产品；胶回收试剂盒：购自上海华舜公司。 1．3RT．PCR引物设计 参照已发表的禽流感病毒基因的各节段的序列和有关文献‘”，设计针对HA基因节段的引物：上游： 5-AGCAAAAGCAGGAGT-3 Kb。反 转录通用；f物：UnH25-AGCAAAAGCAGG．3’。引物均由赛百盛公司合成。 1．4提取病毒总RNA 取含有病毒的尿囊液，按RNA提取试剂盒说明书介绍的方法进行。 1．5反转录合成第—链 按试剂盒说明提取病毒RNA作为模板，以Unil2为引物，反转录合成cDNA。反应体系为：H’o8ul，dNTP (2．5mmol／u1)2Ill，引物(16pmol／uD lul，RNA模板2ul混匀。经42(2，ld时反应；再经95(2，作用5分钟。 1．6PCR扩增目的基因 反应体系为20pL：H208皿。，dNTP(2．5mmol，}IL)2山Mg