66例肾阳虚患者卵泡液蛋白质组学的探究.pdfVIP

∞例肾阳虚患者卵泡液蛋白质组学的研究 连方1 李杰2 吴海萃2王岩2 (1．山东中医药大学附属医院生殖与遗传中心，山东济南，25001l； 2．山东中医药大学临床医学院，山东济南，250355) 近年来，随着生活节奏的改变及环境污染加重等诸多因素，导致人类卵子、精子、受精 卵的质量下降，人类的生殖健康面临威胁。因此如何促进人类生殖健康，研究“肾主生殖” 理论是当前中医药工作者的重要任务。随着现代辅助生殖技术的发展与中医药在其中的不断 应用，“肾主生殖的科学内涵得到不断丰富。卵细胞的发生及排出，胚胎质量及发育潜能， 子宫内膜容受性均与肾中精气的盛衰有密切关系。既往的多项研究已证实补肾中药在提高卵 细胞质量，促进早期胚胎发育，调节子宫内膜容受性等方面的有效性，彰显了中医学“肾主 生殖藏象理论的优势。然而，目前大多数研究仍停留在临床验证和简单的实验研究阶段， 对其科学内涵的研究尚不全面，有待进一步深入探讨。本研究通过观察肾阳虚体外受精一胚 胎移植(IW—ET)周期患者卵泡液中蛋白质组的表达，揭示形成肾阳虚证候的关键蛋白质， 寻找补肾中药作用相关蛋白组份。从蛋白质组学角度阐明“肾虚致不孕以及“补肾促生殖 的科学内涵，搭建适用于“。肾主生殖一蛋白质组学’’藏象理论的研究平台，寻找补肾中药在 治疗肾虚不孕中的作用靶标，建立临床可供参考的疗效评价标准，使传统中医药学与蛋白质 组学相互交融，以期对发展和丰富“肾主生殖理论作出贡献，从临床研究方面，探讨肾虚 致不孕的蛋白质组学机制及补肾中药的疗效机制，以期进一步丰富“肾主生殖理论，为中 医药在人类生殖医学发展中的应用提供更可靠的依据及新的思路。 (1)“肾主生殖”与现代生殖理论 中医理论认为，人类的生殖功能与肾的功能密切相关，认为“肾主生殖”，为先天之本， 肾气盛则天癸至，冲任通盛，月事如期而至，孕育功能正常。肾在女性生殖功能中发挥着巨 大的作用。依据该理论，临床上生殖功能障碍多从肾论治。“肾主生殖理论被广泛地应用 于临床实践中，许多学者对其进行了大量的理论与实验研究，是目前研究热点。近些年来， 现代中医学家不断深入研究“肾主生殖，在古人的基础上从理论和临床上对此理论均有所 发展与创新。现代辅助生殖技术迅猛发展，中医药在其中的应用也不断被重视，‘‘’肾主生殖” 的科学内涵逐渐得到不断地丰富和充实。 藏象理论为中医学的经典，“肾主生殖”理论的研究已经取得了一定的进展，相继提出 了“肾一天癸一冲任一子宫轴”、“中药月经周期理论”学说，而关于其机理的研究从下丘 脑、垂体、靶腺和免疫细胞受体层次；从卵巢到卵巢轴，联系到肾上腺轴，神经内分泌系统 ．．289．． 和免疫系统、代谢系统等，总结得出了妇女生命网络调控的医学观点。现代辅助生殖技术的 迅猛发展及中医药在其中的不断参与，也在一定程度上丰富了该理论。这些研究均对临床起 到了积极的指导意义，在不同程度上丰富和充实了“肾主生殖”理论，但是并末能全面诠释 其科学内涵， “肾主生殖”理论的研究目前仍是研究的热点，需要我们的深入研究，揭示调 节卵细胞的发育、成熟、排卵等过程和调节生殖功能的新机制。 (2)肾阳虚不孕患者卵泡液蛋白质组表达分析 本课题运用高分辫率的双向电泳技术，获得三组蛋白图谱，点分离清楚，三次重复实验， 三张胶重复性好，并得到了明显的差异点，因此在鉴定分离的蛋白质是有效的。结果显示共 有19种蛋白质发生了显著型的变化，或上调或下调，结果已经在前文中描述。这些差异蛋 白可能参与卵泡发生或卵细胞成熟。经过MALDI-TOF质谱分析，初步建立了卵泡液大分子 蛋白质谱图，鉴定了5种成熟卵泡液中表达显著增高的差异蛋白质点。关于白蛋白在卵细胞 成熟过程的作用既往研究报道很多，我们在此不作赘述。在初步鉴定的蛋白质中，我们发现 这些蛋白质涉及脂质代谢、免疫反应、细胞分子黏附、蛋白酶解等方面。 卵泡发育及其调节是一个相当复杂的问题，本实验通过蛋白质组学分离并成功鉴定了部 分在超促排肾阳虚患者卵泡液中表达具有显著性差异的蛋白，这些蛋白包括与脂质代谢、蛋 白水解及免疫反应相关，这些蛋白质表达的异常变化是肾阳虚对卵泡发育影响的直接证据， 为进一步揭示肾阳虚对正常卵泡发育、卵子质量乃至机体正常代谢的影响提供了重要的线索。 ．．290．．