庆大霉素生物合成基因genB4PB3K模块功能研究.pdfVIP

  庆大霉素生物合成基因 genB PB K 模块功能的研究 4 3 陈洲琴 洪文荣* （福州大学生物科学与工程学院，福州350108 ） 摘要:以绛红色小单孢菌 G1008 基因组为模板，庆大霉素生物合成基因簇上的 genB4-genK 为靶 标，扩增靶标上、下游序列作为同源交换臂，以温敏型质粒pKC1139 为基础，构建重组质粒 pBK003 ， 通过去甲基化修饰后，经接合转移导入绛红色小单孢菌 G1008，利用安普霉素抗性筛选，得到阳性 转化子 BK1 。通过 PCR 和测序鉴定，证明 pMK003 已插入绛红色小单孢菌 G1008 基因组的目标位 点。经松弛培养后，筛选得到双交换菌株，命名为绛红色小单孢菌 GBK1(△genB4-K ），成功敲除了 绛红色小单孢菌 G1008 庆大霉素生物合成基因簇上的 genB PB K 模块，为该模块功能研究奠定了基 4 3 础。 关键字：绛红色小单孢菌庆大霉素结合转移 中图分类号：Q93 文献标识码： A Study on gene function of genB PB Kin Gentamicin biosynthetic 4 3 gene cluster CHEN zhou-qin，HONG Wen-rong* (College of Biological Science and Technology, Fuzhou University, Fuzhou 350108) Abstract ：Two exchange arms, respectively located upstream and downstream of module genB4PB3K ， were amplified by PCR from M. purpureaG1008 genomic DNA. The recombinant plasmid pMK003 was constructed by the arms and thermal sensitive plasmid pKC1139. Then it was transformed into M.purpurea G1008 by conjugation. One positive transformant was selected from the plate with apramycin, named BK1. After PCR identification and sequencing, it was confirmed that pMK003 was integrated into the chromosome of G1008. GBK1( △genB4-K ）was constructed after repeated screeningon thebasis of homologous recombination mechanism. It successfullyknockouted the midule geneB4PB3Kfrom M. purpurea G1008 genomic DNA, which laid the foundation forthe module functional studies . Keywords:Micromonosporapurpurea ； Gentamicin ；Conjugation 庆大霉素是一类广谱抗生素，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都有抗菌作用，是重要的抗 感染的药物。庆大霉素属多组分代谢产物，主要由庆大霉素 A ，B ，X 和 C