B病毒重组蛋白的构建及其抗原性检测.pdfVIP

维普资讯 HeilongjiangAnimalScience andVeterinaryMedicine No7 2008 82 B病毒重组蛋白的构建其抗原性检测 卢爱桃 ，姚松坡 ，呼和巴特尔 (1．内蒙古农业大学 动物科学与医学学院，内蒙古 呼和浩特010018； 2．海 口维堤瑷生物研究院，海南 海 口570311) 中图分类号：$852．659．1 文献标识码 ：B 文章编号：1004—7034(2008)07—0082—02 B病毒 (BV)在分类上属疱疹病毒科 甲型疱疹病 释倍数 以及酶标二抗 的最佳工作浓度)，每孔 毒亚科单纯疱疹病毒属。猴是 B病毒的自然宿主， 100 L，锡纸盖好，4 过夜；室温洗板 5次，每孔加 感染率可达 10％～60％，多数情况下呈 良性经过，仅 封闭液 200IxL，用锡纸盖好 ，室温放置 2h；洗板 5 在 口腔黏膜和生殖器黏膜出现疱疹和溃疡，之后病毒 次．将稀释到合适倍数的一抗(血清)每孔加 100IxL， 可长期潜伏在三叉神经节和腰骶神经节。 每个样品做2个平行样(同时设阳性对照、阴性对照 随着国际市场对SPF猴需求量的增加 ，BV病毒 和空 白对照，空白对照用 PBST代替血清)；用锡纸盖 的排除也成了亟待解决的问题 。为了能更加准确有 好，37 作用30min，洗板 5次；用稀释液稀释二抗， 效地排除BV病毒，笔者利用 已知的BV序列，从中截 每孔加 100IxL(同时设阳性对照、阴性对照和空 白对 取含 片段的DNA序列 (该序列的高度保守性在 照)；然后用锡纸盖好，37 放置 30min，洗板 5次； 遗传学中已经证 明)，将该序列进行化学合成，合成 每孔加底物(TMB)100IxL，37oC避光放置 10min，阳 以后再进行构建、表达、纯化，最后将重组蛋 白用于临 性对照变为亮绿色；每孔加 100IxL终止液，使反应终 床 BV疾病的筛查，同时与市场上现有的诊断试剂盒 止；酶标仪读数，波长为450nm。 进行对 比，现将结果报道如下。 1．34 结果的判定 如检测结果阳性对照大于阴性 1 材料和方法 对照2倍 ( P， 2．0)则认为本次检测是有效的。 1．1 试验动物 待测样品的0 高于阴性对照21倍 (S／NI21) 广西某猴场笼养恒河猴 514只，其中雄猴 281 则判为阳性；介于2．0～2．1之间(2．0≤S／N2．1)， 只、雌猴 233只。 则判为可疑。 1．2 被检血清 2 结果与分析 空腹静脉采血 3mL，室温静置 5h，1000r／min 2．1 对比重组抗原与VRL诊断试剂盒的检测结果 离心 10min；吸出血清于另一支 1．5mL离心管中并 本试验对广西某猴场笼养恒河猴血清 BV抗体 做标记 ；56oC灭活 30min；一80oC保存 ，备用。 进行了检测，共检测 514份样品，重组蛋 白ELISA检 1．3 试剂及配制方法 一 测结果为阳性 154份，阳性率为29．96％(154／514)； BV诊断试剂盒，美 国VRL公司提供 ；HRP标记 商品化试剂盒的检测结果为阳性 111份，5份可疑， 羊抗猴 IgG，Sigma公司生产。