黄鳝嗜水气单胞菌的分离鉴定及中药体外抑菌效果研究.pdfVIP

中国畜牧兽医 2010年第37卷第2期 疾病防治 ·135- 黄鳝嗜水气单胞菌的分离鉴定及中药体外抑茵效果研究 周飞1，刘娟1，黎德兵2 (1．四川I农业大学动物医学院，雅安625014；2．四川农业大学动物科技学院，雅安625014) 摘要：黄鳝出血病又叫败血症。该病主要由嗜水气单胞菌感染所致，其发病率与死亡率高，给黄鳝养殖业带来了巨大的 损失。本试验在出现黄鳝败血症的养殖场病鳝体中分离到了嗜水气单胞菌，并选取大黄、黄芩、黄柏、黄连、五倍子、穿心莲、虎 杖、金银花、杜仲、石榴皮、钩藤、板蓝根12种单味中药，采用纸片法对其做体外抑菌试验，从而评价中草药对该菌的抑菌效果， 为以后开发中药制剂和黄鳝出血症的预防奠定理论基础。 关键词：黄鳝；嗜水气单胞菌；分离；鉴定；中药；体外抑菌效果 中图分类号：$858．99 文献标识码：B 文章编号：1671—7236(2010)02—0135—03 黄鳝以营养丰富、味道鲜美、药用价值高而备受 接种蔗糖胰蛋白胨肉汤。28℃摇床(30r／min)培 人们青睐，然而伴随黄鳝养殖业的迅猛发展，各种疾 养48h。培养后10000r／min离心10min，取上清。 病也随之而来，其中以嗜水气单胞菌引起的黄鳝出 用微量加样器取5肚L点样于硝酸纤微素膜光面， 血症危害最大，一般发病率达30％，其中死亡的要 37℃烘干。置20％脱脂奶中，37℃封闭1h。用 占70％，这给黄鳝养殖业带来了巨大的损失(曾双 含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2min。置 明，2007)。本试验从病鳝体内分离出细菌并进行鉴1：50兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中，37℃作 定，然后采用纸片法进行药敏试验，从而评价所选中 用1h。用含吐温一20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次 药的体外抑菌效果，为黄鳝出血症的防制提供理论 2 依据。 h。用含吐温一20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2 1材料 min。最后加3，3-__--氨基联苯胺一过氧化氢显色，作 病鳝来自四川绵阳的一家黄鳝养殖场，挑选发 用10min后用去离子水终止显色。设无菌肉汤作 病症状与黄鳝出血症症状相同的黄鳝，其余的试验 阴性对照(GB／T18652—2002)。 材料由四川农业大学动物医学院病原微生物实验室 2．2．3茵悬液人工感染试验 将分离到的细菌接 h， 提供。 种于新鲜营养琼脂斜面，28℃恒温培养16～18 2试验方法 用无菌生理盐水洗下菌苔，制成菌悬液，用比浊法将 2．1 细菌的分离培养用1／1000的高锰酸钾对病菌悬液细菌浓度稀释为1．0×108CFU／mI。，取已观 鳝的体表进行消毒，然后用灭菌剪刀打开腹腔，分别 察14d的健康黄鳝10条，腹腔注射菌悬液，每条注 取肝脏、消化道、血液于普通营养琼脂平板上作划线 射0．1mL；另取同样大小的健康黄鳝10条，每条注 分离，28℃培养18～24h，待平板上长出形态一致 射0．1mI。的无菌生理盐水作为对照组。注射组及 的优势菌落后，挑取单个光滑、微凸、圆整、无色或淡 对照组置于不同水池中，正常管理，连续观察5d，记 黄色，镜检为革兰氏阴性的优势菌落再次划线分离， 录黄鳝的死亡数昔及症状。 直到获得纯的细菌为止(范例等，2009)。 2．2．4人工再感染试验在人-丁感染患病濒死的 2．2细菌的鉴别 黄鳝中，取临床症状与自然患病濒死黄鳝症状相似 2．2．1 生化特性检测 将培养所得单菌落接种生 的黄鳝肝、肾和脾等组织进行常规再分离，挑取与