DB13T 946-2008 蛋禽H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术规程.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 946-2008 蛋禽H5亚型禽流感免疫抗体 卵黄检测技术规程 2008-03-28发布 2008-04-12实施 河 北省质 量技术 监督局 发布 DB 1 3/T 946-2008 PIJ 舀 本标准由河北省畜牧兽医局提出。 本标准起草单位:河北省动物疫病预防控制中心、河北省畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人:郑文波、白玉坤、冯雪领、韩庆安、孟艳、吴秀楼、杨秀女、胡自然、武秋双、 刘红、许玉静、郑丽、李志民、李同山、张绍军、刘乃强。 DB13/T 946-2008 蛋禽H5亚型禽流感免疫抗体 卵黄检测技术规程 范围 本标准规定了蛋禽H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术中的样本采集、试验准备、试验方法、 结果判定等操作方法。 本标准适用于用卵黄进行蛋禽H5亚型禽流感灭活疫苗免疫抗体检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究是否可以使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB/T 18936 高致病性禽流感诊断技术 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 蛋禽 已经产蛋的禽类。 3.2 检样 经过直接稀释或氯仿萃取制备好的、用于检测的样品。 3.3 跳管 血凝抑制试验中.同一检样在反应板上出现的前、后孔凝集抑制而中间孔凝集的现象。 4 样本采集 采集蛋禽免疫接种H5亚型禽流感灭活疫苗21 d后所产的新鲜禽蛋。 5 试验准备 5.1材料准备 5.1.1 仪器设备 96孔900V型微量反应板、微量移液器、滴头、微量振荡器、离心机、液体快速混合器、容量瓶。 5.1.2 试剂 a)葡萄糖、柠檬酸钠、柠檬酸、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、盐酸等。 b)禽流感病毒H5亚型HI抗原、禽流感病毒H5亚型阳性血清和阴性血清。 5.2 试液配制 5.2.1 阿氏(Alsevers)液配制 称取葡萄糖2.05 g、柠檬酸钠0.8 g、柠檬酸0.055 g,氯化钠0.42 g，用适量蒸馏水溶解后，移人 100 ml容量瓶中，定溶。用0.01 mol/L氢氧化钠或0.01 mol/L盐酸调pH值至6.1, 69 kPa高压灭菌15 min, DB13/T 946-2008 4℃保存备用。 5.2.2 1%鸡红细胞悬液配制 采集至少三只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用 pH7.2 0.01 moUL PBS洗涤3次，每次均以1 000 r/min离心10 min，洗涤后用PBS配成1% (VN)红 细胞悬液，4℃保存备用。 5.2.3 0.01 mol/L PBS试液 a)称取磷酸氢二钠2.74 g，磷酸二氢钠0.79 g，用适量蒸馏水溶解后，移人100 mL容量瓶中， 定溶。 b)量取上述溶液40 ml，加人氯化钠8.5 g溶解后，移人1 000 mL容量瓶中，定溶。 c)用0.01 moUL氢氧化钠或0.01 mol/L盐酸调pH值至7.2，高压灭菌备用。 5.3 检样制备 5.3.1 卵黄直接稀释 在样品管中加入0.5 ml PBS液，再吸取0.5 ml卵黄做1:1稀释，混匀制成卵