固定化酶乙醇荧光毛细分析法的研究.pdfVIP

维普资讯 第39卷 第 1期 四川 大 学 学报 (工 程 科 学 版 ) V0I．39No．1 2007年 1月 JOUtLNALOFSICHUANUNIVERSITY (ENGINEERINGSCIENCEEDITION) Jan．2OD7 文章编号：1009-3087(2007)01-0074-04 固定化酶乙醇荧光毛细分析法的研究 李永生 ，高秀峰 (I．四川大学 化学工程学院，四川成都610065；2．四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都610041) 摘 要：提出了固定化酶乙醇荧光毛细分析 (IE—EFCA)的新方法和乙醇毛细生物反应器 (ECBR)。ECBR用交联 剂将乙醇脱氢酶和辅酶I固定于毛细管内壁制成 ，可重复使用。IE—EFCA法的实验条件 ：激发波长350am、发射 波长459／ira、反应时间20rain、反应温度4|DaC、磷酸缓冲液浓度0．1m0 L(pH7．5)、NAD 浓度5mmol／L、ADH固 定化酶的浓度 10U／L；乙醇的线性范围2．0～15g／L，r0．9958，检出限为 1．1g／L，RSD1．7％。IE—EFCA法重 现性好、操作简便 ，能节约贵重的酶试剂，实现乙醇的微量化、快速化测定；可制成荧光毛细乙醇测试盒，用于医药、 卫生、工业、食品和环境等含乙醇样品的测定。 关键词：荧光毛细分析；NADH；乙醇 ；测定 中图分类号：0657．8 文献标识码：A ResearchontheImmobilized—enzymeAlcoholFluorescenceCapillaryAnalysis L／Yong．sheng，GAOXiu-feng (I．SchoolofChem．Eng．，SiehuanUniv．，Chengdu610065，China； 2．WestChinaSchoolofPrecliniealandForensicMedicine，SichuanUniv．，Chengdu610041， China) Abstract：A new methodforhtedeterminationofehtanolbasedonhteimmobilized。enzymefluorescenceeapiHarya。 nalysis(IE—EFCA)wasproposed．Alcoholdehydrogenation(ADH)wasimmobilizedininnersurfaceofaeapil— lary．AfterNAD asan oxidizerwasmixedwith hte samplessolution，thedeterminationwasconducted tohte mixedoslutioninhtecapillaryat350nm ofexcitedwavelengthandat459nm ofemissionwavelength．Theexperi— mentalconditionsofrethanoldeterminationareasfollows：reactiontimeis20min，temperatureis40℃ ，thecon— centrationsofphosphatebufferoslution(pH7．5)andNAD are0．1moVLand5mmo1．／L，respectively；imm obi· lizationconcentrationofADH is10U／L．Thelinearrangeofrthedetemrinationofehtanolis2．0～15．0g／L．r 0．9958，thedetectionlimitofethanolis1．1g／L，RSD is1．9％ ．IE—EFCA methodisapplicableofrthedetemr i— nat