固体表面特征对脲变α-糜蛋白酶折叠的贡献.pdfVIP

维普资讯 2007年第65卷 化 学 学 报 Vo1．65，2007 第2l期．2411～24l6 ACTACHIM ICASINICA No．21．24ll～24l6 研究论文 固体表面特征对脲变a一糜蛋白酶折叠的贡献 刘振岭 柯从玉 李建军 耿信笃术 (西北大学现代分离科学研究所 现代分离科学陕西省重点实验室 西安 710069) 摘要 以脲变6t一糜蛋白酶(6c—Chy)为模型蛋白，用蛋白折叠液相色谱法研究了该蛋白在 7种不同固体表面上的折叠及其 在折叠过程中形成的中间体，选用疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相为吸附剂，在动态条件下着重研究了疏水色谱固 定相TSK和 PEG一600表面对脲变6tChy复性效率的贡献．用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱对 3．0mol·L 脲变 6tChy，在经 HPHIC 柱复性并同时分离的收集组分进行确认后，仅有一种稳定的脲变 6t—Chy折叠中间体．发现 PEG一600固定相表面较TSK固定相对 6c—Chy复性效果好．证实了疏水性强度及固体表面配基的结构对蛋 白折叠起着关 键性的作用． 关键词 疏水色谱；固体表面；蛋白折叠；6t一糜蛋白酶；折叠中间体 ContributionofSolidSurfacetoUrea．denatured a-ChymotrypsinFolding LIU，Zhen—Ling十 KE Cong—Yu LI，Jian—Jun GENG，Xin．Du ， (InstituteofModernSeparationScience，ShaanxiKeyLaboratoryofModernSeparationScience， NorthwestUniversity，Xian710069) Abstract Thecontributionofthesurfacesofsevenkindsofsolidswhicharethestationaryphaseofhy— drophobicinteractionchromatography(HIC)tothefoldingofurea—denatured，。c—chymotrypsin(。c—Chy)was investigatedunderadynamicconditionandtheformedintemr ediatewasisolated．ThesurfacesoftheHIC stationaryphaseofPEG一600 andTSK wereselectedasthetypicalsolidsurfacestostudythefoldingefn— ciencyoftheurea—denatured。c—Chyandtheisolatedintemr ediateof。c—Chy．Theobtainedresultindicateshtat thechraacterofasolidsurfacehasasignificantcontribution toproteinfolding．CompraedwiththeTSK column．thesurfaceofPEG一600stationaryphaseisefficientfortherenaturationoftheurea—denatured。c—Chy andforitsqualitycontrolduring。c—Chyfolding．M atrix—assistedlaserdesorptionionizationtimeofaflight mas