降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YJ-1角蛋白酶纯化及酶学性质研究.pdfVIP

西 南 农 业 学 报 2013年26卷 3期 982 SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences V01．26 No．3 文章编号 ：1001-4829(2013)03—0982-05 降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌 YHYJ一1角蛋 白酶纯化及酶学性质研究 朱友峰 ，岳寿松 ，宋爱荣h，游银伟 ，尤升波 ，王翠萍 (1．青岛农业大学生命科学学院，山东青岛 266109；2．山东省农业科学院高新技术研究中心，山东济南 250100) 摘 要：利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖 G．100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ·1所产角蛋白酶，纯化 的角蛋 白酶，经 SDS—PAGE蛋白电泳分析，分子量为48．3kda。结果表明，该酶最适反应温度和最适pH值分别为5O℃和 9．0，30 — 4O℃具有较好的温度稳定性，6O℃酶活下降很快；在pH7．0～9．5的范围内具有较好的稳定性。金属离子Ni“、zn 对角蛋白 酶具有明显抑制作用，Cu¨、Fe“、Fe¨能完全抑制酶活；1％巯基乙醇对酶具有明显激活作用。EDTA和PMSF对该角蛋白酶几 乎完全抑制，可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶，是一种新的蛋白酶。 关键词：角蛋白酶；嗜麦芽窄食单胞菌；性质；纯化 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A PurificationandCharacterizati0n0fA NovelKeratinasefrom Feather-degradingStenotrophomonasmaltophiliaStrainYHYJ·1 ZHU You—feng ·，YUEShuc—song2’ SONGAi．tong ，YOU Yin-wei，YOUSheng-be ，WANG Cui—ping2 ， (1．SchoolofLifeSciences，QingdaoAgriculturalUniversity，ShandongQingdao266109，China；2．High-TechResearchCenter，Shandong AcademyofA culturalSciences，ShandongJinna 250100，China) Abstract：Akeratinaes escretedbyafeather-degradingStenotrophomonasmaltophiliastrainYHYJ-1cultivatedinmediumcontainingchicken feathermealwa purifiedbyammonium sulphateprceipitationandSephadexG-100chromatographic．Themolecularmassofthepurifieden— zymeWaSestimatde tobe48．3kDabysodiumdodecylsulfate(SDS)polyacrylamidegelelcetrophoresis．Theresultshowde thattheoptimum pH andtemperatureforthepurifiedkeratinaes were9．0nad50。C．respectively．Th ekemfin~eWagstableatpH7．0and9．5℃ or30—40 ℃ ，naditsactivitydecreasedrapidlyat60℃ ．TheenzymeWfl8inhibitde byNi nadZn“ whollyinhibitedbyCu“ Fe nadFe¨ ， ，