地生枝顶孢胞外多糖的理化性质和结构初步分析.pdfVIP

维普资讯 菌 物 学 报 23(4)：529-535，2004 Mycosystema 地生枝顶孢胞外多糖的理化性质和结构初步分析 于春秀 李春如 彭凡 樊美珍 (安徽农业大学省微生物防治重点实验室 合肥 230036) 摘 要：报道分离自地生枝顶孢AcremoniumtemcolaRCEF0260菌株发酵滤液中的胞外多糖EPS．Ia 的理化性质和一级结构。EPS．Ia分子量为416kD，至少含有D．甘露糖、D．葡萄糖、D．半乳糖、D． 阿拉伯糖、D木糖，各单糖摩尔比为4．46：0．24：2．38：0．90：0．19。糖醛酸含量为27．4％。硫酸基含量 0．92％、蛋白质含量2．23％。氨基酸组成分析显示：EPS．Ia中含有 17种常见氨基酸。EPS．Ia为D 型吡喃糖，含有1—3糖苷键，1—6糖苷键及 1—2糖苷键，其中的糖肽键是N一糖苷键。 关键词：真菌多糖，一级结构，虫草 中图分类号：Q939．97 文献标识码：A 文章编号：1672．6472(2004)04．0529．0535 天然生化药物是生物技术药物中最重要而有效的先导化合物，从20世纪初至今，从天然资源 中筛选新药仍然是一种必要的手段，许多生物技术药物都是在此基础上发展起来的。多糖作为药 物始于1943年，但作为广谱免疫抑制剂而引起人们极大兴趣的是在六十年代以后(方积年，1986)。 至今，已有部分真菌多糖的化学结构和生物活性得到了深入细致的研究，有些已经被开发成药物。 毫无疑问，真菌多糖及其复合物将继续成为分子生物学、医药和食品等领域的研究热点之一。 地生枝项孢Acremoniumterricola(Milleret )GamsRCEF0260菌株，从古尼虫草小孢变种 Cordycepsgunniivat．minorZ．Z．Lieta1．上分离获得，其发酵滤液中的胞外粗多糖经检测可诱导B 和T淋巴细胞增殖，既对AA大鼠过低的ConA增殖反应有明显的促进作用，又对从大鼠低下的 Ⅱ广一2产生有明显的促进作用。果蝇寿命试验表明，50％醇沉部分可延长果蝇寿命，其延长率为 31．5％ (金涌等，2000；于春秀等，2002；Lieta1．，1998)。本文对上述活性部位进行了进一步纯 化得到精多糖EPS．Ia组分，其理化性质和一级结构报道如下。 1材料与方法 1．1供试菌株 地生枝项孢AcremoniumterricolaM(illereta1．)GanisRCEF0260菌株由安徽林苑虫草研究所提 供。 1．2仪器和试剂 高速冷冻离心机、SENCOR-501旋转蒸发器、W501升降叵温水浴锅、SHZ．D循环水式真空 泵、MDF-382E超低温冰箱、LGJ1．5冷冻干燥机、6010紫外．可见分光光度计、柱层析系统、电 热恒温水浴锅、t岛津GC．9A气相色谱仪、Dn．III4电泳仪、日立835．50氨基酸自动分析仪。 DEAE一纤维素DE-52、葡聚糖凝胶G．150、琼脂糖凝胶Sepharose6B、标准葡聚糖，其余试 安徽省 自然科学基金项 目资助 通讯作者：Em·ail：mzfan@ahau．edu．cn 收原稿日期：2004．07-02，收修改稿日期：2004．08．11 维普资讯 530 菌 物 学 报 剂除注明外，均为分析纯或化学纯。 1．3胞外多糖EPS．Ia的的制备 将离心去除菌丝体的发酵液调pH值至7，4~C放置1h左右，待沉淀析出，5000rm／in离心10min， 得上清液于60~C下浓缩至原体积的1／4。冷却后，加入95％乙醇，将发酵液调至乙醇终浓度30％， 去除沉淀后，调节乙醇终浓度为50％，沉淀冻干后为粗多糖。 将粗多糖上DEAE．DE52离子交换柱，采用0--2mol／LNaC1溶液梯度洗脱，苯酚一硫酸法检 测糖分布，收集含糖主峰部分，对流水透析过夜，蒸馏水透析 48h，冷冻干燥，得胞外多糖主组 分EPS．1。经高效液相色谱检测后，将收集的主组分上SephadexG．150层析柱层析，苯酚硫酸法 检测，收集其强峰，冷冻干燥得多糖纯品EPS—Ia。 1．4多糖的理化性质及组成分析 1．4．1