免疫荧光技术检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌.pdfVIP

畜牧与兽医 2011年 第43卷 第6期 ·63· 免疫荧光技术检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 董 伟 ，李孝文，李 艺，杨小丰，康丹菊，赵晴晴，孙志良 (湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128) 摘要 ：为建立一种准确简便诊断猪传染性胸膜肺炎的方法，以某猪场2o头具有典型发病症状病猪或死猪鼻腔、气管、胸腔的液体作病料，分别 滴鼻接种于2O只Balb／c小 鼠，同时以灭菌生理盐水作对照。24h后，接种病料的小鼠死亡。采取死亡小 鼠的肺脏 ，充分研磨，然后加灭菌生理 盐水作 1：5稀释，取上清液，加入适量放线杆菌兔源血清抗体，混匀后 ，分别于 5、10、30rain时进行涂片，用FITC标记羊抗兔 IgG染色，然 后用荧光显微镜观察。结果显示：从死亡小 鼠病料涂片中能检测出放线杆菌，其形态与放线杆菌参考菌株革兰染色形态一致 。接种生理盐水小 鼠 未出现死亡，处死后取其肺部组织进行检测，未检测出放线杆菌。2O份样品检测结果均为阳性 ，且该诊断结果与相同病料微生物学诊断结果 一 致 。 关键词 ：传染性胸膜肺炎；病原学诊断；免疫荧光技术 中图分类号 ：$855．1 文献标识码：A 文章编号：0529—5130(2011)06—0063—04 伴随畜牧业快速发展，养殖业已成为国民经济支 体，但 由于受到疫苗接种和非致病性病原的干扰，现 柱产业之一，其 中养猪业所 占比例最大。 目前猪传染 行的血清学诊断方法误诊率较高 。因此 ，当前 病发生的频率越来越高，尤其是细菌性疾病对养猪业 在生产实践中对PCP的诊断极少依赖实验室诊断方 造成的危害 日益明显，其中猪传染性胸膜肺炎 (por— 法 ，而主要根据其流行特点、临床症状及病理变化进 cinecontagiouspleur0pneumonia，Pep)就是猪群的常 行现场诊断，致使其误诊率高，导致盲 目用药。本试 发病 [121。有效防治 PCP的前提是对其进行准确诊 验应用免疫荧光技术，以猪传染性胸膜肺炎的多克隆 断，目前用于诊断 PCP的实验室方法主要有细菌分 抗体检测病料 中是否存在传染性胸膜肺炎放线杆菌， 离鉴定、PCR方法和血清学方法 。。细菌分离鉴定 将血清学技术应用于病原学诊断，现将结果报告 是先采集病料对其进行分离培养，然后进行病原鉴 如下 定，此方法花费时间长 【。PCR方法是从分子生物 1 材料与方法 学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成 部分，此方法要求昂贵的仪器设备，对实验操作人员 1．1 材料 要求很高 ，且易出现假 阳性现象--， 。血清学方法主 1．1．1 病料来源 要应用血清学技术检测猪体 内传染性胸膜肺炎血清抗 取 自常德某猪场具有典型发病症状病猪或死猪的 鼻腔 、气管、胸腔的液体作病料。 收稿 日期：2010—10-18；修 回日期：2011—04—13 1．1．2 实验动物 基金项 目：湖南省科技厅重点项 目 (2008nk2007)。 Balb／c小鼠20只，雌雄各半，体重 20～22g， 作者简介 ：董伟 (1972一)，博士，副教授 。 购 自湖南中医药大学实验动物部。 通讯作者：孙志 良，教授，研究方向为动物药理学、毒理学与 药剂学，E—mail：sunzhilia“gl965@yahoo．eom．en。 每隔3d对瘘管周围进行检查 、清理和消毒 ，以防止 验方法 [J]．生物学通报 ，1965：35-36． 炎症复发，引起感染。 E4] 曹 杰 ，王春墩