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多项肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的实验对比和临床应用介绍 陆汉魁 高云朝 顾建英 钱晓煜 本文档由【中文word文档库】提供，转载分发敬请保留本信息； 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 上海交通大学附属第六人民医院 核医学科 上海200233 摘自《全国免疫学与分子生物学技术新进展研讨会暨新技术培训班论文汇编》 前言 多项肿瘤标志物生物芯片检测系统（简称C12芯片）是利用生物芯片技术的并行检测能力，在固相基础上预置了12种肿瘤标志物（或肿瘤相关物质）对应的单克隆抗体用于俘获被测血清中对应的肿瘤标志物，对免疫复合物进行酶促光化学反应产生光信号，测光系统根据光信号强度进行线形定量分析，一次检测可以获得AFP、NSE、PSA、fPSA、CEA、CA125、CA242、CA15-3、CA19-9、β-HCG、HGH和铁蛋白共12项指标的含量。这是免疫检测技术方面的一个重要的发展，而且是具有国内自主知识产权的新技术和新产品。 该系统是由上海铭源数康生物科技公司研究开发并逐渐投入临床应用，对此国内已经有许多相关的临床研究报告，这些研究显示该系统具有相当高的临床实用价值，同时也有一些技术问题需要进一步发展和完善。我们对该系统也进行了一系列的初步实验研究和临床研究。本报告介绍C12芯片在临床应用情况，同时报告部分C12的单指标（C6）与目前临床常用的全自动化学发光免疫分析方法(ALICA)的比较研究结果，并对目前的技术发展和临床应用方面的问题提出一些初步的意见和建议。 二．资料方法 CA19-9 Roche Elecsys 2010 37.0 u/ml 35.0 u/ml CEA ABBOT I2000 5.0 ng/ml 5.0 ng/ml SCC ABBOT I2000 2.9 ng/ml 2.5 ng/ml AFP ABBOT I2000 20.0 ng/ml 20.0 ng/ml CK19（cyfra211） Roche Elecsys 2010 3.3 ng/ml 3.3 ng/ml CA125 Roche Elecsys 2010 35.0 u/ml 35.0 u/ml 2．临床资料 采用 C12芯片进行阳性肿瘤标志物筛查。检查对象为门诊怀疑肿瘤需要进行多种检查排除，或老年住院病人以及临床怀疑有恶性肿瘤征象需要排除常见恶性肿瘤者，或临床初步诊断为肿瘤需要筛查肿瘤标志物阳性指标，以及本院职工每年接受常规体格检查并具备随访条件者。具备相关临床资料的累计检查人数为9232例，凡C12芯片检测结果中单项或多项出现异常升高的指标均采用常规免疫检查方法进行复检。临床和随访资料统计病例中，确诊为恶性肿瘤者441例；其他经过相关检查诊断为良性疾病或者经过一年以上阳性单项的指标连续检测排除恶性肿瘤。恶性肿瘤患者中：肝癌（原发性肝细胞肝癌）41例，直结肠癌66例，前列腺癌53例，卵巢癌29例，胰腺癌31例，胆管癌13例，乳腺癌39例，胃癌43例，肺癌47例，淋巴瘤28例，膀胱癌16例；其它癌肿包括鼻咽癌、舌癌、食道癌、喉癌、甲状腺癌、骨肉瘤、肾上腺嗜铬细胞癌等共35例（本报告为初步统计结果，详细结果请见我们后续的相关报道）。 3．C12和C6的检测方法 检测步骤为：抽取静脉血1~2毫升，待血样静置分层或者离心后，吸取上层血清备用。检测用的试剂为C12芯片试剂盒（上海数康科技有限公司），每份试剂盒内含生物芯片板一块，标准品5瓶，校正品（单点）一个，浓缩洗涤液和发光反应液各一瓶。每块芯片含16~48个芯片孔不等，各芯片孔（10*10mm）内分别有25个反应位点，1点作为空白对照用于本底校正，24点分别预制包被有12种肿瘤标志物的检测抗体（一抗），两两依次为平行样。第1到5个芯片孔拟为标准品反应孔，第6个为校正孔。检测设备为HD2001A生物芯片检测仪。检测时将不同浓度的标准品、校正品、内质控样品以及各待测血清各100μl分别依次滴加到不同的芯片格内，将芯片放置在检测仪的反应槽内，开始自动震荡反应、洗涤和加发光反应液（底物为辣根过氧化物酶）。反应结束后，芯片检测仪的光路自行检测芯片板，对每个芯片孔内的25个反应点逐点检测，前24点每连续二点取测量平均值，最后一点拟为非特异结合点）。使用特定的软件读取数据、绘制标准曲线（直线），然后对待测样进行数据分析，打印检测报告。 C6检测系统与C12的差别在于C6各芯片孔只有12个反应位点，预制6种肿瘤标志物的检测抗体，预制抗体量、检测配套试剂和其他过程与C12完全一致。 4．判断标准问题。根据C12芯片试剂盒提供的参考值范围（并根据我们实验室研究的结果进行校正）确定12项指标是否为阳性。对肿瘤疾病或非肿瘤疾病12项指标中的任何一项或者一项以上表现为异常升高