夏枯草药材高效液相指纹图谱研究及应用.docVIP

夏枯草药材高效液相指纹图谱及其模式识别研究 方林能明* 浙江省肿瘤医院临床药学实验室，杭州 310022 摘 要　采用反相高效液相色谱法，建立夏枯草药材的高效液相指纹图谱色谱柱为Elit SinoChrom ODS-AP柱，乙腈-0.01%磷酸溶液进行梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长为203 nm对15不同产地的夏枯草药材进行检测，比较指纹图谱相似度，运用主成分分析法和聚类分析法对其进行模式识别研究。得夏枯草药材对照指纹图谱，共有17个共有峰，各批次指纹图谱及对照图谱间相似度高通过模式识别研究将15批药材分为4类，与样品。可为夏枯草的质量控制提供。 关键词 夏枯草；高效液相色谱法；指纹图谱；主成分分析法；聚类分析法 1 引 言 夏枯草（Spica Prunellae）为唇形科夏枯草属植物夏枯草(Prunella Vulgaris L.)的干燥果穗，夏季采收果穗呈棕红色，除去杂质，晒干即得。性味辛、苦、寒，归肝胆经。有清火，明目，散结，消肿等功效，用于目赤肿痛，目朱夜痛，头痛眩晕，瘰疬，嬴瘤，乳痈肿痛；甲状腺肿大、淋巴结结核、乳腺增生高血压等[1]。现代研究表明，夏枯草含有多种活性化学成分，主要有三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类等化合物，具有降压、降糖、抗菌、抗病毒、抗炎和抗肿瘤等生物活性[2]。 夏枯草产地众多，我国大部地区均有出产此外白毛夏枯草（筋骨草属，Ajuga decum bens Thunb.）[3]、夏至草（夏至草属，Lagopsis supina (steph) IK. Gal.）[4]等夏枯草，因此建立全面系统质控方法十分必要。目前，多采用测定夏枯草中熊果酸、齐墩果酸或者迷迭香酸、咖啡酸等含量来评价其质量[5-8]，指纹图谱分析突破了单一指标成分的质量评价模式，以多维组分整体评价复杂的中药样品，是目前国内外中药质量评价模式。本文采用二元梯度洗脱模式，建立了夏枯草药材高效液相色谱指纹图谱分析方法，并在此基础之上利用主成分分析法、聚类分析法等模式识别方法对研究数据进行了初步挖掘。 2 实验部分 2.1 仪器和试剂 Agilent 1100高效液相色谱仪，包括：四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱、可变波长检测器、数据处理工作站，Sartorius BS 224S电子分析天平，Heraeus Multifuge 3SR+高速离心机。 齐墩果酸(Oleanolic Acid，OA，供含量测定用，批号110709-200304)，熊果酸（Ursolic Acid，UA，供含量测定用，批号110742-200415），均购自中国药品生物制品检定所；迷迭香酸（Rosmarinic Acid，RA，批号A0004，纯度≥98%，成都曼思特生物科技有限公司）；实验中所用夏枯草药材（见表1），分别产自浙江、贵州、河南、广东、江西，并经浙江省肿瘤医院芦柏震主任中药师鉴定；乙腈、甲醇为色谱纯试剂（临海浙东特种试剂厂），水(双蒸水，自制)，其它试剂均为分析纯。 表 1 夏枯草药材产地及批号 Tab.1 　Samples from different sources Habitats Sample No. Batch No. Zhejiang Province ZJ1 080228 Zhejiang Province ZJ2 080318 Zhejiang Province ZJ3 080423 Zhejiang Province ZJ4 080723 Zhejiang Province ZJ5 090306 Guizhou Province GZ1 Guizhou Province GZ2 Guizhou Province GZ3 Guizhou Province GZ4 Henan Province HN1 081119 Henan Province HN2 080716 Henan Province HN3 090717 Guangdong Province GD1 080410 Guangdong Province GD2 090625 Jiangxi Province JX 080821 2.2对照品溶液与供试品溶液制备 精密称取过二号筛（850μm±29μm，24目）的夏枯草粉末1.0 g，于50mL量瓶，加入含1%甲酸的甲醇溶液至刻度，称重，静置30min后超声30min，放冷后称重，以提取溶剂补足减失的重量，取上清液10000 r·min-1离心10 min后，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 2.3 色谱条件 色谱柱：Elit SinoChrom ODS-AP柱 (