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第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体

[学习目标]1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。2.概述单克隆抗体的制备过程。

一、动物细胞融合技术

1．概念：使________或________动物细胞结合形成________的技术。

2．原理：________________。

3．诱导融合的方法eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(PEG融合法,法,法))

4．意义：细胞融合技术突破了________的局限，使________成为可能。

5．应用

(1)成为研究细胞________、细胞________、肿瘤和培育________等的重要手段。

(2)用于制造________。

判断正误

(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒

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(2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构

()

任务一：动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较

1．19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？

2．比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术

(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？

(2)两者在方法上有什么异同？

(3)两者在最终结果上有什么不同？

1．(2022·天津市高二月考)如图表示仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列叙述正确的是()

A．细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合

B．细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质

C．该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性

D．此过程的原理是动物细胞具有全能性

2．对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是()

A．均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合

B．两者都可以跨越种属间的生殖隔离

C．两者都可以体现细胞的全能性

D．在适宜的条件下，均可产生完整个体

二、单克隆抗体及其应用

1．传统抗体的获得

(1)方法：向动物体内反复注射某种______，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需________。

(2)缺陷：________、纯度低、________。

2．单克隆抗体的制备

(1)大量制备单一抗体的思路

(2)存在的问题：B淋巴细胞____________。

(3)解决方案

(4)制备过程

3．单克隆抗体的优点

(1)能准确地识别________的细微差异。

(2)可以与特定抗原发生________结合。

(3)可以________制备。

4．单克隆抗体的应用

(1)用作________，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。

(2)运载药物，如ADC(抗体—药物偶联物)。

(3)直接用于治疗疾病。

判断正误

(1)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，得到的都是杂交瘤细胞()

(2)单克隆抗体制备过程中两次筛选的目的相同()

(3)ADC的抗体具有靶向运输作用、药物具有治疗作用()

任务二：单克隆抗体的制备过程和单克隆抗体的应用

1．根据单克隆抗体的制备过程，回答以下问题：

(1)给小鼠注射特定抗原的目的是什么？

(2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几种细胞？理论上融合的细胞有几种？体系中出现多种类型细胞的原因是什么？(若细胞融合，只考虑两两融合)

(3)单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是什么？方法是什么？

(4)资料：①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。

②免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死亡。

请根据上述资料提出筛选出杂交瘤细胞的方法。

(5)单克隆抗体制备过程中，第二次筛选的目的是什么？方法是什么？其原理是什么？

2．阅读教材“思考·讨论：单克隆抗体的应用”，回答以下问题：

(1)ADC的抗体和药物各具有什么作用？

(2)除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？

(3)单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？

杂交瘤细胞的抗体检测和克隆化培养

融合后的细胞经特定的选择培养基筛选培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用96孔板培养，使每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需要进行3～4次，直至确信每个孔