第8章高效液相色谱法.pptVIP

第十章

液相色谱法一、影响分离的因素factorsinfluencedseparation二、分离类型的选择choiceofseparationtypes三、液相色谱的应用applicationofHPLC四、液相制备色谱preparativeliquidchromatography第四节

影响分离的因素与操作条件的选择highperformanceliquidchromatographfactorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition*第29页，共43页。一、影响分离的因素

factorsinfluencedseparation1.影响分离的因素与提高柱效的途径在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。*第30页，共43页。液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。*第31页，共43页。第8章高效液相色谱法第1页，共43页。液相色谱仪（2）*第2页，共43页。液相色谱仪（3）*第3页，共43页。液相色谱仪（4）*第4页，共43页。二、高效液相色谱法的特点

featureofHPLC特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。*第5页，共43页。三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程*第6页，共43页。2.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性（动画）*第7页，共43页。(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。*第8页，共43页。(3)进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：*第9页，共43页。(4)高效分离柱柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。*第10页，共43页。(5)液相色谱检测器a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。*第11页，共43页。第八章

高效液相色谱法一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph四、离子色谱ionchromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph六、排阻色谱size-exclusionchromatograph七、亲和色谱(AC)Affinitychromatograph第二节

主要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes*第12页，共43页。一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography固定相：固体吸附剂为，如硅胶、