TSATA0002—2017婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）含量的测定微孔板法.docxVIP

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团 体 标准

T/SATA0002—2017

婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）含量的测定微孔板法

Determinationoffolicacid(folateactivity)contentininfantfoodsanddairyproducts—Microplatemethod

2017-07-25发布 2017-08-25实施

深圳市分析测试协会 发 布

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目 次

目次 I

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

原理 1

试剂和材料 1

仪器和设备 2

分析步骤 2

精密度 4

其他 5

前 言

本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由深圳市分析测试协会归口。

本标准主要起草单位：深圳市计量质量检测研究院

本标准主要起草人：刘小青、黄静敏、黄建飞、陈建文、陈晶、兰全学、杨国武本标准为首次发布。

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T/SATA0002—2017

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婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）含量的测定微孔板法

范围

本标准规定了婴幼儿使用的食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的微孔板法测定方法。本标准适用于婴幼儿使用的食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的微孔板法测定。

规范性引用文件

本标准中应用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T6682分析实验用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，ISO3696：1987，MOD）

原理

微孔板形式的微生物法用于定量检测婴幼儿食品和乳品中的叶酸（叶酸盐活性）。将稀释了的叶酸提取物和叶酸检测培养基加入包被有鼠李糖乳杆菌Lactobacillusrhamnosus的微孔中。Lactobacillusrhamnosus的生长状况取决于叶酸的含量。添加叶酸作为标准或者作为样品混合物，细菌会一直生长直至叶酸被消耗殆尽。孵育条件应为37℃条件下暗处孵育44-48h。细菌生长时新陈代谢的强度和叶酸

的含量形成关系并可以绘制称标准曲线，最后通过微孔板酶标仪在610-630nm（或者540-550nm）读取结果。

试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

试剂

无菌蒸馏水。

叶酸培养基。

叶酸标准品。

叶酸缓冲液。

氢氧化钠（NaOH）。

抗坏血酸(C6H8O6Na)。

磷酸二氢钠（NaH2PO4）

检测叶酸总量所需试剂：猪胰酶（SigmaP1750）、鸡胰酶（R-BiopharmP2002）。

高峰淀粉酶（taka-Diastase）。

试剂配制

氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取8g氢氧化钠溶于100mL水中，混匀。

氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4g氢氧化钠溶于100mL水中，混匀。0.1mol/L。

氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：称取0.4g氢氧化钠溶于100mL水中，混匀。

磷酸盐缓冲液（0.05mol/L,0.1%抗坏血酸钠，pH7.2）：称取7.8g磷酸二氢钠和1g

抗坏血酸钠溶解于1L蒸馏水中，校正pH至7.2；每天新配缓冲液。

仪器和设备

5.1

天平：感量为0.1mg。

5.2

无菌工作台。

5.3

恒温水浴锅。

5.4

pH计：精度±0.01。

5.5

微量移液器：100μL、1000μL、30μL-300μL八通道排枪。

5.6

涡旋振荡器。

5.7

粘合箔。

5.8

微孔板框。

5.9

带无菌注射器的0.22μm无菌滤膜。

5.10

无菌V型槽

5.11

96孔微孔板，包被有Lactobacillusrhamnosus（r-biopharm公司VitaFast?

叶酸检测试剂盒）。

5.12

生化培养箱：36℃±1℃。

5.13

酶标仪。

分析步骤

试样提取

检测样品中的添加叶酸时，采用热水提取方法，检测样品中的叶酸总量（包括原生和添加叶酸）时样品应进行酶化处理，一般情况为检测样品中的添加叶酸。

含添加叶酸的婴幼儿使用的婴儿食品和乳品（添加叶酸）

称量1g（精确至0.0001g）均质样品至一个50mL无菌试管中，加入约30mL磷酸盐缓冲液，摇匀，加磷酸盐缓冲液至40mL（婴幼儿米粉类样品需加入300mg高峰淀粉酶，37℃酶解30min以利于样品