TBDAS_0012021_牛奶中褪黑素含量的测定_液相色谱串联质谱法.docxVIP

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X04

团体标准

T/BDAS001-2021

牛奶中褪黑素含量的测定液相色谱-串联质谱法

Determinationofmelatonincontentinmilk—Liquidchromatography-tandemmassspectrometry

2021-08-11发布 2021-09-10实施

北京市奶业协会发布

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由北京首农食品集团有限公司提出，北京市奶业协会归口管理。

本文件起草单位：北京首农食品集团有限公司、中国农业大学、北京三元种业科技股份有限公司、北京首农畜牧发展有限公司、北京三元食品股份有限公司、北京市奶业协会、北京奶牛中心。

本文件主要起草人：刘国世、常毅、刘巧香、郭刚、马慧、陈历俊、李德勇、张红涛、廖晨星、刘林、白萨茹拉、姚松阳、刘雪凝、付瑶、王静、张伟宏、白沥冰、关盛宇、吴昊、丛慧敏。

该文件为首次发布。

牛奶中褪黑素含量的测定液相色谱-串联质谱法

范围

本文件规定了牛奶中褪黑素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素的测定。

本文件检测方法的检出限为0.04μg/L，定量限为0.10μg/L。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

原理

牛奶中的褪黑素用甲醇提取后，用液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。

试剂或材料

试剂

除非另有说明，所用试剂均为分析纯。

水：GB/T6682，一级。

甲醇（CH3OH）：色谱纯。

甲酸（CH2O2）：色谱纯。

0.1%甲酸水溶液（体积比）：取1mL甲酸加入至1000mL水中。

标准品

褪黑素标准品（C13H16N2O2，CAS号：73-31-4）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

标准溶液配制

褪黑素标准储备液：准确称取褪黑素标准品100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解，并定容至100mL棕色容量瓶中，既得1mg/mL的标准储备液，于-18℃中保存，有效期为1个月。

褪黑素标准中间液：精密移取0.10mL褪黑素标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀既得10μg/mL的标准中间液。

褪黑素标准工作液：精密移取0.10mL褪黑素标准中间液于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀既得100ng/mL的标准工作液，临用现配。

材料

一次性微孔滤膜：0.22μm，有机相。

仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

分析天平：感量0.0001g。

超声波清洗机。

低温高速离心机：离心力不低于10000g。

旋涡混合仪。

移液管。

样品

从所取全部样品中取出具有代表性试样约100mL，充分混匀，均分为两份，一份为正样，一份为备样，分别装入洁净容器中，密封，并注明标记。试样如需保存，于-18℃以下冷冻保存。

试验步骤

试样制备

取适量有代表性的样品，液态牛奶样品直接摇匀，冷冻样品室温融化后充分均匀，置于超声波清洗机37℃超声30min。

提取

准确移取1mL试样置于15mL离心管中，准确加入4mL甲醇，使用旋涡混合仪振荡提取10min，-18℃静置30min。使用低温高速离心机以10000g、4℃离心5min，上清液过0.22μm有机相滤膜过滤至样品瓶，获得试样溶液，供液相色谱-串联质谱测定。

基质匹配标准工作溶液的制备

空白样品基质的制备

选取与样品属于同一类型的空白牛奶（褪黑素含量在检出限以下），按照8.2制备后，作为本检测法的空白基质。

基质匹配标准上机溶液的配制

用8.3.1制备的空白样品基质溶液配制浓度0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.10ng/mL和0.20ng/mL的基质匹配标准上机系列溶液。临用现制。

仪器参考条件

液相色谱参考条件

色谱柱：C18反相色谱柱，50mm×2.1mm，粒径1.8μm，或性能相当者；柱温：40℃；

流速：0.4mL/min；进样量：2μL；

流动相及梯度洗脱结果见