动物细胞培养课件.pptVIP

2）非貼附型細胞

體外生長不必貼壁，可在培養液中懸浮生長，因此也叫懸浮型細胞。一些在體內原本就以懸浮狀態生長的細胞或微生物，當接種於體外環境中也可以以懸浮狀態生長。血液白細胞、淋巴組織細胞，某些腫瘤細胞、雜交瘤細胞、轉化細胞系等都屬此類細胞。這類細胞形態學特點是胞體始終為球形。懸浮培養類似微生物的深層培養。由於是懸浮生長，細胞密度一般都較高，培養的效率也高、操作也容易。這種方法有多方面的優越性，易於大規模生產，便於過程的控制。可惜能在懸浮狀態下生長的細胞種類有限，不太方便觀察。10.3.2細胞培養物（1）原代培養物（研究、治療和生產疫苗）★取自動物組織的細胞直接接種於生長培養基皮膚、雞胚、淋巴、鼠腦等★原代培養物中含有各種不同分化的細胞類型，它們的生長速率各不相同，成纖維細胞最易生長。控制培養基成分，可以選擇性地支持某些類型細胞的生長。（2）正常細胞（安全，人用疫苗的生產）四個典型特徵：●二倍體的染色體互補表明沒有明顯的基因改變；●有限的壽命反映了細胞的生長調節；●細胞無惡性，將該細胞注入免疫抵制動物不能形成腫瘤；●貼壁依賴和密度抑制表明其增殖受到控制，當細胞在介質表面生長至匯合單層時增殖就停止。（3）轉化細胞（無限壽命，生產生物製品）●正常細胞在培養中可能獲得無限增殖的能力，成為連續細胞系。實際上，這些細胞經過了一個轉化的過程，喪失了對生長控制的敏感性。●轉化伴隨著染色體模式的改變。更典型的表現是，貼壁依賴性細胞對貼壁的依賴及細胞密度的抑制發生改變，雖然也許細胞仍須貼壁生長，但可能生長到不止單層。●並非所有轉化細胞都是惡性的。自發轉化、化學轉化、病毒轉化、致瘤因數轉化（4）腫瘤細胞◆來自於腫瘤細胞的細胞或經腫瘤細胞與其他細胞融合產生的細胞，如雜交瘤細胞。◆惡性的，呈現非貼壁信賴性；有很好的增殖特性，生長速率高，對生長因數的信賴程度低，對培養環境的要求也不很苛刻。◆具有致瘤性——難以用於體內治療產品的生產10.4動物細胞培養基10.4.1動物細胞培養的環境影響動物細胞生長、繁殖的環境因素很多，主要有溫度、pH值、營養成分、溶氧、氣體環境、滲透壓以及其他因素。（1）溫度★來源不同的動物細胞，其最適的生長溫度各不相同，例如昆蟲細胞的最適溫度是25-28℃，人和哺乳動物細胞的最適溫度37℃。★細胞代謝強度與溫度成正比，高於最適溫度範圍，細胞的正常代謝和生長將會受到影響，甚至導致死亡。總的來說，動物細胞對低溫的耐受力比對高溫的耐受力強。（2）pH值★動物細胞合適的pH值一般在7.2-7.4，低於6.8或高於7.6時都對細胞產生不利影響，嚴重時可導致細胞退變或死亡。★不同細胞對pH值要求不同，原代培養細胞對pH值的變化耐受性差，傳代細胞對pH值的變化耐受性較強。★對於同一種細胞，增長期和維持期的最適pH值也不完全相同。（3）營養成分碳源、氮源、氨基酸、無機鹽、微量元素、生長因數等（4）溶氧及氣體環境●同一細胞在不同生長時期對氧的需求不盡相同，一般在培養初期要求較低的溶氧水準，而在對數生長期或培養後期，當細胞增多時，溶氧的水準相應地提高●溶氧主要影響細胞的繁殖，溶氧濃度太低時，細胞生長代謝受阻；而濃度過高又對細胞產生毒害作用。因此需選擇最佳溶氧水準。●二氧化碳既是細胞的代謝產物，也是細胞需要的營養成分，同時還是調節培養基pH值的重要物質。（5）滲透壓等其他因素多數培養細胞對滲透壓有很寬的耐受範圍。其他因素如粘度、表面張力和泡沫等對細胞也有影響。10.4.2培養基的組成天然培養基：使用最早、最為有效，主要取自於動物體液或從動物組織分離提取而得，優點是營養成分豐富、培養效果良好；缺點是成分複雜，個體差異大，來源有限；合成培養基：根據天然培養基的成分，用化學物質對細胞體內生存環境中各種已知物質在體外人工條件的模擬，經過反復實驗篩選、強化和重新組合後形成的培養基。用於動物細胞的培養基可分為兩大類（1）天然培養基★血清（最常用的天然培養基）：含有蛋白質和核酸等豐富的營養物質，來源主要是動物，有小牛血清、胎牛血清、馬血清、兔血清以及人血清等★血漿：一般使用的是禽類血漿，易液化，目前已很少單獨使用★組織浸出液：常用的是胚胎浸出液（如雞胚浸出液），主要成分含有大分子核蛋白和小分子的氨基酸，有促進細胞生長的作用★水解乳蛋白：常用，是由乳白蛋白經水解而制得，氨基酸的含量較高。一般配製成0.5%的溶液，或與合成培養基以的1：1比例共同使用（2）合成培養基目前，細胞培養都已採用標準化生產、組成和含量都相對固定的各種培養基，並已有配製好的乾粉型商品。合成培養基配方所含成分不同，但一般都含有氨基酸