生物化学考研酶化学.pptVIP

酶专一性的“诱导契合学说”第30页，共76页，星期日，2025年，2月5日与酶的高效率有关的主要因素（略讲）——“邻近”和定向效应——酶底物间的非共价相互作用——共价催化——酸硷催化——微环境影响第31页，共76页，星期日，2025年，2月5日酶分子中可作为亲核基团和酸硷催化的功能基团第32页，共76页，星期日，2025年，2月5日第四节影响酶促反应速度的因素

（酶促反应动力学）

一、酶促反应速度的测定与酶的活力单位二、各种因素对酶反应速度的影响第33页，共76页，星期日，2025年，2月5日酶促反应速度的测定与酶的活力单位

1、测定酶促反应的速度必需测初速度2、酶活力3、酶活力的表示方法4、酶活力测定方法：终点法动力学法检测酶含量及存在，很难直接用酶的“量”（质量、体积、浓度）来表示，而常用酶催化某一特定反应的能力来表示酶量，即用酶的活力表示。酶催化一定化学反应的能力称酶活力，酶活力通常以最适条件下酶所催化的化学反应的速度来确定。第34页，共76页，星期日，2025年，2月5日酶活力测定方法

终点法:酶反应进行到一定时间后终止其反应，再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。动力学法:连续测定反应过程中产物\底物或辅酶的变化量，直接测定出酶反应的初速度。第35页，共76页，星期日，2025年，2月5日

酶活力的表示方法

活力单位（activeunit）习惯单位（U）:底物(或产物)变化量/单位时间国际单位（IU）:1μmoL变化量/分钟Katal（Kat）：1moL变化量/秒比活力=总活力单位总蛋白mg数=U(或IU)mg蛋白量度酶催化能力大小转换系数（Kcat）底物（μmoL）/秒·每个酶分子量度酶纯度比活力（specificactivity）量度转换效率第36页，共76页，星期日，2025年，2月5日有一个10mg粗酶制品，比活为100U/mg,经纯化获得0.01mg纯酶制品，比活为80000U/mg。回答：酶的纯化倍数？酶的回收率是多少？纯化倍数=比活（纯酶）/比活（粗酶）=800回收率=总活力（纯酶）/总活力（粗酶）=80000*0.01/100*10=80%第37页，共76页，星期日，2025年，2月5日各种因素对酶反应速度的影响

2、底物浓度3、pH（最适pH的概念）4、温度（最适温度的概念）5、激活剂6、抑制剂1、酶浓度当S足够过量，其它条件固定且无不利因素时，v=k[E]第38页，共76页，星期日，2025年，2月5日底物浓度对酶反应速度的影响?酶反应速度与底物浓度的关系曲线（Michaelis—Menten曲线）?米氏方程的提出及推导?米氏常数的意义?米氏常数的测定第39页，共76页，星期日，2025年，2月5日单分子酶促反应的米氏方程及Km推导原则：从酶被底物饱和的现象出发，按照“稳态平衡”假说的设想进行推导。米氏方程:米氏常数:第40页，共76页，星期日，2025年，2月5日酶反应速度与底物浓度的关系曲线第41页，共76页，星期日，2025年，2月5日米氏方程的推导令：将（4）代入（3），则：[ES]生成速度：，[ES]分解速度：即：则：(1)经整理得：由于酶促反应速度由[ES]决定，即，所以(2)将（2）代入（1）得：(3)当酶反应体系处于恒态时：当[Et]=[ES]时，(4)所以第42页，共76页，星期日，2025年，2月5日米氏常数的意义*当v=Vmax/2时，Km=[S]（Km的单位为浓度单位）*是酶在一定条件下的特征物理常数，通过测定Km的数值，可鉴别酶。*可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，E对S的亲合力愈大，Km愈大，E对S的亲合力愈小。*在已知Km的情况下，应用米氏方程可计算任意[s]时的v，或任何v下的[s]。（用Km的倍数表示）练习题：已知某酶的Km值为0.05mol.L-1，要使此酶所催化的反应速度达到最大反应速度的80％时底物的浓度应为多少？第43页，共76页，星期日，2025年，2月5日米氏常数的测定

基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。例：双倒数作图法（Lineweaver-Burk法）