腺病毒介导肝细胞生长因子基因：肺动脉高压大鼠治疗新策略探究.docxVIP

腺病毒介导肝细胞生长因子基因：肺动脉高压大鼠治疗新策略探究

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1肺动脉高压的危害与现状

肺动脉高压（PulmonaryArterialHypertension，PAH）是一种以肺血管阻力进行性升高为主要特征的严重心血管疾病，其血流动力学诊断标准为海平面静息状态下，右心导管监测肺动脉平均压大于等于25mmHg。根据病理表现、血流动力学特征以及临床诊断，肺动脉高压可分为五大类，包括动脉性、左心疾病所致、缺氧或肺部疾病引起的、慢性血栓栓塞性以及多种机制或不明机制引起的肺动脉高压。

PAH对患者的生活质量和生命健康造成了极大的威胁。患者常见的临床表现有活动后气短、乏力、胸痛、咯血，随着病情的恶化，严重时在运动中会出现晕厥、心绞痛、右心功能不全等症状，甚至发展为右心衰竭，严重影响患者的生活自理能力和日常活动，预期寿命也显著缩短。如特发性肺动脉高压患者，若不进行有效治疗，中位生存期仅为2-3年。

目前，临床上针对肺动脉高压的治疗手段存在诸多局限性。传统药物治疗，如钙通道阻滞剂，仅对少数急性肺血管扩张试验阳性的患者有效；而内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶-5抑制剂等靶向药物，虽能在一定程度上改善患者症状和血流动力学指标，但无法从根本上治愈疾病，且长期使用可能会产生耐药性和不良反应。此外，肺移植是终末期肺动脉高压患者的一种治疗选择，但由于供体短缺、手术风险高、术后免疫排斥反应等问题，其应用受到了极大的限制。因此，寻找一种更为有效的治疗方法迫在眉睫。

1.1.2肝细胞生长因子与肺动脉高压的关联

肝细胞生长因子（HepatocyteGrowthFactor，HGF）是一种多功能的细胞因子，最初作为能刺激肝细胞增殖的物质被发现。它不仅对肝细胞有作用，还能作用于上皮细胞、造血细胞、血管内皮细胞等多种细胞，通过旁分泌或自分泌机制，借助上皮间质的相互作用，在胚胎发生、创伤愈合、血管发生、组织器官再生、形态发生和致癌作用等方面发挥着重要作用。

HGF具有多种生物学功能。在血管生成方面，它能够刺激新生血管生成，促进血管内皮细胞增生和新生血管形成，其作用因子活性强大，能促使内皮细胞表现出增殖、迁移、细胞间互相黏着、排成直线以及形成开放腔样结构等一系列特殊、复杂的行为；在组织修复方面，可促进组织细胞的发生、生存和再生，抑制细胞凋亡，例如能够抑制高糖环境下内皮细胞的程序性死亡，促进血管内皮细胞再修复；同时，还能调节胶原纤维的合成和炎性反应，在促进创伤愈合与防治组织纤维化中起重要作用。

在肺动脉高压的发病机制中，HGF也扮演着重要角色。研究表明，在肺动脉高压状态下，肺动脉内皮细胞、平滑肌细胞和间质细胞中的HGF表达水平通常下降。而HGF表达的异常可能导致肺血管内皮细胞功能障碍、平滑肌细胞异常增殖和血管重塑，进而促使肺动脉高压的发生和发展。基于此，通过提高HGF的表达水平，有可能调节肺血管的生理功能，抑制血管重塑，从而为肺动脉高压的治疗提供新的思路。研究HGF基因治疗肺动脉高压具有潜在的重要价值，有望为肺动脉高压患者带来更有效的治疗策略，改善患者的预后和生活质量。

1.1.3腺病毒介导基因治疗的优势与应用前景

腺病毒载体作为一种常用的基因传递工具，具有诸多独特的优势，使其在基因治疗领域展现出广阔的应用前景。

腺病毒载体的宿主范围广泛，能够感染一系列哺乳动物细胞，包括人类及非人类细胞，对人致病性低。人类感染野生型腺病毒后通常仅产生轻微的自限性症状，且病毒唑治疗有效，这使得其在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。尤为重要的是，腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数肿瘤就是上皮细胞来源的，这为其在肿瘤基因治疗等领域的应用提供了便利。

与逆转录病毒只能感染增殖性细胞不同，腺病毒能感染几乎所有的细胞类型，除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤细胞，是研究原代非增殖细胞基因表达的最佳系统，它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比。此外，腺病毒系统能有效进行增殖，滴度高，可产生101?到1011VP/ml，浓缩后可达1013VP/ml，这一特点使其非常适用于基因治疗，能够满足临床治疗所需的基因剂量要求。

腺病毒载体系统一般应用人类病毒作为载体，以人类细胞作为宿主，因此为人类蛋白进行准确的翻译后加工和适当的折叠提供了一个理想的环境，大多数人类蛋白都可达到高水平表达并且具有完全的功能。而且，腺病毒不整合到染色体中，无插入致突变性，避免了因随机整合到宿主染色体而导致的基因失活或激活癌基因的风险，安全性较高。同时，293细胞可以适应悬浮培养，使得腺病毒能在悬浮培养液中扩增，大量事实证明悬浮293细胞可在1-20L的生物反应器中表达重组蛋白，有利于大规模生产和制备