生物工业下游技术第八章膜的分离过程.pptVIP

操作步骤先把DEAE-SephadexA-50装入3×40厘米的柱中，用pH值为7.6、2.5微摩尔／升的缓冲液上柱，等流出液的pH值为7.6时，然后将样品上柱，用pH值7.6、2.5微摩尔／升～50微摩尔／升的缓冲液进行梯度洗脱(洗脱液浓度从2.5微摩尔／升开始逐渐加大至最终浓度达50微摩尔／升，这样便形成一个洗脱梯度)，收集具有SOD的活性峰。第61页，共113页，星期日，2025年，2月5日第62页，共113页，星期日，2025年，2月5日第63页，共113页，星期日，2025年，2月5日第64页，共113页，星期日，2025年，2月5日第65页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤将洗脱液倒入透析袋中，在蒸馏水中进行透析(透析方法是利用小分子物质在溶液中通过透析袋，而蛋白质和粘多糖等大分子不能通过透析袋的性质而达到不同大小分子分离的一种方法)，然后将透析液经超滤浓缩后，冷冻干燥即为SOD产品。第66页，共113页，星期日，2025年，2月5日新鲜猪血分离血球黄色血浆（供制备凝血酶用）红血球血红蛋白（弃去）离心液沉淀清夜（弃去）沉淀物热变沉淀（弃去）上清液上清夜（回收）沉淀溶解杂物（弃去）上清液DEAE－SephadexA-50分离纯化洗脱液透析液浓缩干燥除血红蛋白冷丙酮产品从猪血中提取SOD第67页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤分离血球：取新鲜牛血，按100kg牛血加3.8g柠檬酸三钠投料，搅拌均匀，装入离心管中，在离心机中以3000转／分速度离心15分钟，收集血球，血浆可用于制备凝血酶。第68页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤除血红蛋白：红血球用两倍0.9％氯化钠溶液离心洗涤三遍，然后向洗净的红血球加入等体积去离子水，剧烈搅拌30分钟，于0～4℃静置过夜。再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，搅拌15分钟左右；静置30分钟，然后用离心法除去沉淀，收集微带蓝色的清澈透明粗酶液体。第69页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤沉淀：在上清液中加入2倍体积的冷丙酮，搅拌均匀，于冷处静止20分钟，离心收集沉淀。沉淀物用1～2倍体积的水溶解，在55℃水浴中保温15分钟，离心收集上清液。再用2倍冷丙酮使上清液沉淀，静置过夜。然后离心收集沉淀，上清液可回收丙酮。第70页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤沉淀：在上清液中加入2倍体积的冷丙酮，搅拌均匀，于冷处静止20分钟，离心收集沉淀。沉淀物用1～2倍体积的水溶解，在55℃水浴中保温15分钟，离心收集上清液。再用2倍冷丙酮使上清液沉淀，静置过夜。然后离心收集沉淀，上清液可回收丙酮。第71页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤DEAE—SephadexA-50分离纯化：把以上沉淀溶于pH值为7.6、2.5μmol／L的K2HPO4-KH2PO4缓冲液中，用离心法除去杂质，收集上清液准备上柱。第72页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤先把DEAE-SephadexA-50装入3×40厘米的柱中，用pH值为7.6、2.5微摩尔／升的缓冲液上柱，等流出液的pH值为7.6时，然后将样品上柱，用pH值7.6、2.5微摩尔／升～50微摩尔／升的缓冲液进行梯度洗脱(洗脱液浓度从2.5微摩尔／升开始逐渐加大至最终浓度达50微摩尔／升，这样便形成一个洗脱梯度)，收集具有SOD的活性峰。第73页，共113页，星期日，2025年，2月5日操作步骤将洗脱液倒入透析袋中，在蒸馏水中进行透析(透析方法是利用小分子物质在溶液中通过透析袋，而蛋白质和粘多糖等大分子不能通过透析袋的性质而达到不同大小分子分离的一种方法)，然后将透析液经超滤浓缩后，冷冻干燥即为SOD产品。第74页，共113页，星期日，2025年，2月5日第二节液膜分离第75页，共113页，星期日，2025年，2月5日由于固体膜存在选择性低和通量小的缺点，故人们试图用改变固体高分子膜的状态，使穿过膜的扩散系数增大、膜的厚度变小,从而使透过速度跃增,并再现生物膜的高度选择性迁移。在60年代中期诞生了一种新的膜分离技术－液膜分离法,又称液膜萃取法，这是一种以液膜为分离介质、以浓度差为推动力的膜分离操作。它与溶剂萃取虽然机理不同、但都属于液-液系统的传质分离过程。简介第76页，共113页，星期日，2025年，2月5日当液膜为水溶液时(水型液膜)，其两侧的液体为有机溶剂；当液膜由有机溶剂构成时(油型液膜)，其两侧的液体为水溶液。因此，液膜萃取可同时实现萃取和反萃取。这是液膜萃取