丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制.pptxVIP

丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制主讲人：葛静制作人：胡波

实验目的实验原理实验材料与仪器实验步骤实验结果记录注意事项实验讨论

实验目的：学习和掌握竞争性抑制作用的特点。观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。

实验原理化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。E+SESE+P+IEI+SEIS+I

琥珀酸脱氢酶：是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用

实验材料与仪器：器材：大白鼠、手术剪、滴管镊子、纱布、漏斗、量筒、烧杯、研钵刻度吸量管试管及试管架、恒温水箱、试剂：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液0.2mol/L丙二酸溶液0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/LPH=7.4磷酸盐缓冲液、0.02%甲烯蓝

酶提取液的制备：取大白鼠的骨骼肌，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH在7.4。在研钵中碾碎，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。01实验步骤:02

取试管6支，编号，在按图步骤操作酶提取液（ml）磷酸缓冲液（ml）0.2mol/L琥珀酸（滴）0.02mol/L琥珀酸（滴）0.2mol/L丙二酸溶液（滴）0.02mol/L丙二酸溶液（滴）蒸馏水（滴）甲烯蓝（滴）褪色时间（分钟）试管12—8———83试管22—8——8—3试管32—8—8——3试管42——88——3试管5—28———83试管62—8———83试管6：酶提取液在100℃水浴中保温

各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约0.5cm，各管置于37℃的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。

实验结果记录：褪色时间（分钟）[I]/[S]试管1试管2试管3试管4试管5试管6

、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。37℃水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。【注意事项】：

酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随[I]/[S]逐渐增大，而增大。丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点：最大反应速率Vmax不变，米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。本实验中5号、6号试管的作用是做对照，5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在100℃的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失活的。实验讨论：

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