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pH与pIpHpI带负电,电场中移向正极pHpI带正电,电场中移向负极pH=pI不带电,电场中不移动第30页,共43页,星期日,2025年,2月5日等电点的应用氨基酸在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动,从而分离氨基酸或蛋白质。处于等电点的氨基酸溶解度最小。当溶液的pH被调到其中一种成分的等电点时,该氨基酸将大部分或全部沉淀下来。其它等电点高于或低于该pH的氨基酸仍保留在溶液中,可利用此性质进行氨基酸的分离。1、电泳分离2、沉淀分离第31页,共43页,星期日,2025年,2月5日-OOC—CH2—NH2HCHO-OOC—CH2—NHCH2OHHCHO-OOC—CH2—N(CH2OH)2N,N–二羟甲基甘氨酸酚酞指示剂NaOH直接测定氨基酸的浓度氨基酸的性质
----氨基酸的甲醛滴定第32页,共43页,星期日,2025年,2月5日构成蛋白质的20种氨基酸在在远紫外区(220nm)均有光吸收。在近紫外区(200-400nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。利用分光光度计法在280nm测定样品中蛋白质的含量.氨基酸的性质
----芳香族氨基酸的紫外吸收第33页,共43页,星期日,2025年,2月5日氨基酸的化学反应?-氨基和?-羧基共同参与的反应?-氨基参与的反应?-羧基参与的反应侧链R基团的化学性质第34页,共43页,星期日,2025年,2月5日定性、定量检测氨基酸Pro的茚三酮反应呈黄色在弱酸性条件下,氨基酸与茚三酮共热,生成蓝紫色化合物,分光光度法570nm测定,释放的CO2可用测压法测量,计算出参加反应的氨基酸的量。氨基酸的化学反应--?-氨基和?-羧基共同参与的反应
----茚三酮的反应(Ninhydrin)第35页,共43页,星期日,2025年,2月5日AA+多肽蛋白*用来鉴定多肽或蛋白质N-端氨基酸弱碱DNP-AADNP-多肽DNP-蛋白+HF酸解DNP-AA(有机相)+游离AA(水相)氨基酸的化学反应--?-氨基反应
----2,4-二硝基氟苯反应(Sanger反应)黄色化合物DNFB第36页,共43页,星期日,2025年,2月5日DNS-氨基酸黄色荧光氨基酸的化学反应--?-氨基反应
----丹磺酰氯反应(Dansylchloride,DNS-Cl)DNS-ClAA,多肽,蛋白质*用来鉴定多肽或蛋白质N-端氨基酸弱碱第37页,共43页,星期日,2025年,2月5日弱碱AA+多肽蛋白PTC—AAPTC—多肽PTC—蛋白无水甲酸或HFPTH-AA+少一个AA的多肽或蛋白(有机相)氨基酸的化学反应--?-氨基反应
----苯异硫氰酸酯反应(Edman降解法)(水相)*用来鉴定多肽或蛋白质N-端氨基酸PITC苯乙内酰硫脲衍生物第38页,共43页,星期日,2025年,2月5日氨基酸的化学反应
----肽键反应第39页,共43页,星期日,2025年,2月5日非标准氨基酸第40页,共43页,星期日,2025年,2月5日生物活性氨基酸第41页,共43页,星期日,2025年,2月5日非标准氨基酸第42页,共43页,星期日,2025年,2月5日生物活性氨基酸第43页,共43页,星期日,2025年,2月5日生物化学氨基酸第1页,共43页,星期日,2025年,2月5日Chapter2蛋白质(Protein)Questions:为什么每一种生物的外观形态都有差异?为什么动物可以运动?为什么食物能在较低的温度(体温)下被很快消化?为什么人的体温超过40?C就难以忍受?为什么说AIDS病是一种可怕的病症?2009年8月6日美国北卡罗来纳大学报告破译了艾滋病病毒的完整基因组人免疫缺陷病毒(HIV)第2页,共43页,星期日,2025年,2月5日蛋白质是生物功能
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