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一文速览：ELISA检测入门指南

ELISA测试简介

ELISA（酶联免疫吸附试验）检测是一种广泛应用于生物学和医学领域的免疫检测方法，其主要目的是测量生物样品中的抗体或抗

原含量，这些目标物质可以是蛋白质、糖蛋白等。与其他免疫检测法相似，ELISA测试依赖于抗体与目标物质之间的特异性结合来实现

检测目的。

ELISA检测通常在96孔板等微孔板中进行，这种格式使得该方法能够同时处理并筛选多个样品，从而提高了检测效率。血清、血

浆、细胞培养上清液、细胞裂解液、唾液、组织裂解液以及尿液等多种类型的液体样品均可用于ELISA检测，但需要注意的是，某些样

品中可能存在的抑制性因素，如与目标物质共享相似抗原表位的缓冲液成分或可能破坏目标或检测成分的蛋白酶等，可能会对检测性能

产生干扰。

尽管存在多种不同的ELISA检测形式，但它们都遵循一个共同的基本原理：利用目标物质本身或能够特异性捕获目标的抗体/抗原

与包被在微孔板表面的物质进行结合。随后，通过一系列测定步骤，包括结合抗原（或更常见的抗体），来检测和量化这种成功的结合，

其中最常见的是通过比色测定来实现。

ELISA测试的类型与示意图概述

ELISA（酶联免疫吸附试验）测试，最初由瑞典斯德哥尔摩大学的EvaEngvall和PeterPerlman以及荷兰的AntonSchuurs和

BaukevanWeemen独立构思，旨在提供一种安全、有效的免疫检测方法，以替代具有潜在危险的放射免疫检测。他们通过设计基于酶

的替代品，实现了这一目标。

目前，ELISA测试主要分为四种主要类型：直接法、间接法、夹心法和竞争法。

各类型ELISA简述：

.直接法ELISA：

.在此方法中，抗原直接包被在微孔板上，随后加入酶标抗体与抗原结合。通过洗涤去除未结合的酶标抗体后，加

入底物进行显色反应，从而测定抗原的存在。

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.间接法ELISA：

.间接法中，抗原同样包被在微孔板上，但随后加入的是未标记的一级抗体（针对抗原的特异性抗体）。洗涤后，

再加入酶标二级抗体（针对一级抗体的抗体）进行结合。最后，通过底物显色反应来测定抗原。

.夹心法ELISA：

.夹心法适用于测定大分子抗原，如蛋白质。在此方法中，两种特异性抗体分别包被在微孔板的两个不同区域或同

时包被。加入样品后，抗原与两种抗体结合形成“夹心”。随后加入酶标抗体（针对其中一种抗体的抗体）进行结合，并通过底物显色

反应来测定抗原。

.竞争法ELISA：

.竞争法中，包被在微孔板上的可以是抗原或抗体。加入样品（含有未知浓度的抗原或抗体）和酶标抗原或抗体后，

它们将竞争性地与包被物结合。通过洗涤和底物显色反应，可以测定样品中抗原或抗体的浓度。

需要注意的是，虽然上述描述以抗原测定为例，但同样的原理也适用于抗体的测定，只需调整抗原和抗体的角色即可。此外，ELISA

测试的具体步骤和条件可能因实验设计和目标物质的不同而有所差异。

2.1ELISA直接法

在ELISA直接法中，样品中的抗原或抗体首先以非特异性的方式直接吸附到包被板上。随后，向孔中加入特异性测定抗体或抗原

以进行结合。之后，通过加入测定底物来产生可测量的颜色变化，这一变化可以在读板器上进行量化。

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由于直接法步骤相对简洁，操作速度快，且相较于其他ELISA方法，引入错误的机会更少，因此具有一定的优势。然而，由于吸

附步骤的非特异性，这种方法往往伴随着较高的背景噪音。此外，