初级检验士临床免疫学myxjy jy0701.pdfVIP

第七章

第一节免疫技术

第二节

第三节免疫分析

第四节技术的应用

第一节免疫技术

是利用性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。

早期的免疫技术是基于竞争性结合反应原理的（RIA），稍后又发展了非竞争性结合的免

疫分析（IRMA）。

一、基本类型及原理

1.（RIA）

是以性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗

原量的一种分析法。

2.免疫分析（IRMA）

是用性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的

非竞争法。

二、常用的性核素

免疫技术常用的性核素有125131314125

Ⅰ、Ⅰ、H、C等。使用最广泛的是Ⅰ。

三、标志物及鉴定

采用性碘（如125Ⅰ）标志物的基本原理是以性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨

酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。

（一）标记及类型

1.直接标记法

最常用于肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其原理是采用化学或酶促氧化反应直接将125Ⅰ结合于被标志物分

子中酪氨酸残基或组胺残基上。

其特点是标记方法操作简便，容易将较多的125Ⅰ结合到被标记蛋白分子上，易得到比性较高的标志

物。常用的方法为：①氯胺T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。

2.间接标记法

也称连接标记法（Bolton-Hunter法），是最常用的间接碘标记方法。该法主要用于甾体类化合物、环核

苷酸、素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。

纯化标志物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标志物分子极性差异进行吸附解离的

离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶

电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。

（二）标志物的纯化

125125

Ⅰ标志物反应后，标志物需进行分离纯化以去除游离Ⅰ和其他杂质。纯化标志物的方法有利用分子筛

机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标志物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和

直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱

法。

（三）标志物的鉴定

1.化学纯度

是指单位标志物中结合于被标志物上的性占总性的百分率，一般要求大于95%。

2.免疫活性

指的标志物与抗体结合的能力。

3.比性

指单位化学量标志物中所含的性强度，也可理解为每分子被标志物平均所结合性原子数目，常用

Ci/g、mCi/mg或Ci/mmol等单位表示。比性计算方法有计算法和自身置换法。