植物组织培养技术在农业中的应用.pptVIP

另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂，可用0.55％多菌灵和抗生素（如0.1%链霉素）。对于某些田间种植的材料，可以切取插条放入Knop溶液中使其长大，由这些插条的腋芽长成的枝条，要比由田间植株上直接取来的枝条污染小的多。第93页，共151页，星期日，2025年，2月5日Knop溶液：成分：硝酸钾1克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾1克，硝酸钙3克。配制：先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙，用20毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。第94页，共151页，星期日，2025年，2月5日为了保险起见，在切取外植体之前一般仍须对茎芽进行表面消毒。叶片包被严紧的芽（如菊花、兰花），只须75%酒精中浸蘸一下；叶片包被松散的芽（如香石竹、蒜和马铃薯等），要用0.1%次氯酸钠表面消毒10分钟。对于这些消毒方法，在工作中应灵活运用，如在大蒜茎尖培养时，可将小鳞茎在75%酒精中浸蘸一下，再用灯火烧掉酒精，然后解剖出无菌茎芽。第95页，共151页，星期日，2025年，2月5日3）剥取茎尖：把茎芽置于解剖镜下，一只手用镊子将其按住，另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织（0.2～0.5mm）切下来，为了提高成活率，可带1-2枚幼叶（原基），然后将其接到培养基上。接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。第96页，共151页，星期日，2025年，2月5日4）茎尖培养：将接种好的茎尖置于22℃左右的温度下。每天以16小时2000-3000lx的光照条件下培养。在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月才能成功。茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。第97页，共151页，星期日，2025年，2月5日4.病毒检测病毒检测是茎尖脱毒不可缺少的步骤常用鉴别寄主，即指示植物或血清学方法进行检测。及时淘汰血清学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗；无任何反应的茎尖苗即脱毒苗用作繁殖。第98页，共151页，星期日，2025年，2月5日通常签订方法有四种：1.外观判断法：带病毒株往往叶片发黄，凹凸不平，畸形，可根据这些表现来判断。但有些病毒表现不明显，仅靠这一方法还不够。2.嫁接法：利用指示植物（实生苗）作为砧木，被检测植物作为接穗，进行嫁接。若带病毒则枯死；不带病毒则成活。第99页，共151页，星期日，2025年，2月5日3.指示植物法：此方法适合鉴定靠汁液传染的病毒。将被检测植物的植物汁液涂抹在指示植物（实生苗）的叶片上，根据发病情况，判断脱毒植物是否还带有病毒及其浓度。指示植物对病毒的反应敏感，容易接种，通常不同病毒应选用不同的植物。常用指示植物有千日红、曼陀罗、豇豆、心叶烟、辣椒等。第100页，共151页，星期日，2025年，2月5日4.抗血清鉴定法（抗原－抗体反应）抗血清鉴定法是最常用的方法之一。原理：病毒是由蛋白质和核酸组成的，是一种较好的抗原。将病毒给动物注射后，会产生抗体。这种抗原和抗体的结合，即为血清反应。抗原：病毒。抗体：是指生物体在外来抗原的刺激下产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中。含抗体的血清称为抗血清。各种病毒都有各自的特异性，可以用抑制病毒的血清来测定未知的病毒种类具体测定方法有沉淀反应，凝聚反应。第101页，共151页，星期日，2025年，2月5日5.电子显微镜检查法用电子显微镜直接观察，检查有无病毒存在，并根据病毒的大小、形状和结构等来判断病毒种类。此法鉴定程序简单，方法先进，但需要设备和技术。第102页，共151页，星期日，2025年，2月5日植物茎尖培养示意图第103页，共151页，星期日，2025年，2月5日(1)外植体大小和叶原基在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多；并且外植体越小脱毒效果越好。叶原基的存在影响分生组织形成植株的能力一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。在含有必要的生长调节物质的培养基中，离体顶端分生组织能在组织重建过程中迅速形成双极性两端。因此，带不带叶原基，与物种和培养基有关。5.影响微茎尖培养的因素第104页，共151页，星期日，2025年，2月5日（2）培养条件

在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果好，