液相色谱类型刘双枝开封大学87课件.ppt

主讲人：刘双枝开封大学液相色谱根据分离机制不同，可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱分子排阻色谱等类型。一、液一液分配色谱法在液-液色谱中，流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。1．分离原理液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。2、固定相将特定的液态物质涂于担体表面化学键合于担体表面而形成的有机键合层如C18（十八烷基硅烷）、C8（辛烷基）、氨基键合硅胶固定相类型极性固定相：正相色谱以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等键合在硅胶表面制成的非极性固定相：反相色谱反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。正相色谱法反相色谱法1.极性固定相聚乙二醇、氨基与腈基键合相2.相对非极性流动相正已烷、环已烷3.极性调节剂???乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷4.分离中等极性和极性较强化合物.???酚类、胺类、羰基类及氨基酸类5.组分流出顺序极性小先洗出1.非极性固定相C18（简称ODS）、C82.极性流动相水或缓冲液3.极性调节剂???甲醇、乙腈、四氢呋喃4.分离非极性和极性较弱化合物占整个HPLC应用的80%左右5.组分流出顺序极性大先洗出液?固吸附色谱是以固体吸附剂作为固定相，吸附剂通常是些多孔的固体颗粒物质，在它们的表面存在吸附中心。液固色谱实质是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。1．分离原理当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，与流动相溶剂分子（S）在固定相表面发生竞争吸附:X+nS吸附=X吸附+nS二、液?固吸附色谱法X+nS吸附=X吸附+nS其中K为吸附平衡常数，值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗脱。K值小,则保留值弱，易于洗脱。试样中各组分据此得以分离。K值可通过吸附等温线数据求出。达平衡时，有吸附脱附再吸附再脱附…分离过程是一个吸附－脱附的平衡过程。液固吸附色谱法分离机理吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，因此，以硅胶用得最多。在高效液相色谱法中，表面多孔型和全多孔型都可作吸附色谱中的固定相，目前最广泛使用的还是全多孔型微粒填料。2．固定相一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。3、流动相