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霍乱弧菌检测的检查过程

(1)、增菌

称取检样25g，加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。固体样品应以均质器9000r/min-10000r/min打碎，或以剪刀充分剪碎。(36±1)℃培养6h-8h和16h-24h。

如为牡蛎样品，应同样制备另一份检样，置于APW中，42℃培养6h-8h和16h-24h。

(2)、分离

以3mm-5mm接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个，于(36±1)℃培养18-24h。

在TCBS琼脂上，典型的霍乱弧菌菌落为大的，光滑，黄色，稍平，具有不透明中心和半透明的边缘。

(3)、初步鉴定

①用接种环挑取TCBS琼脂平板上2-5个可疑菌落，划线于T1N1琼脂平板上，(36±1)℃培养12h-18h。

②以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物，滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。

③以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中，进行粘丝试验。

④以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物，接种TSI、KIA和AGS，穿刺底层并划线斜面。

⑤以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。

⑥将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h-24h。