细胞工程 动物细胞培养.pptVIP

2非粘附型细胞（悬浮型细胞）

体外生长不贴壁，可在培养液中悬浮生长，因此也叫悬浮型细胞。一些在体内原本就以悬浮状态生长的细胞或微生物，当接种于体外环境中也可以以悬浮状态生长。血液白细胞、淋巴组织细胞，某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等都属此类细胞。这类细胞形态学特点是胞体始终为球形。第28页，共45页，星期日，2025年，2月5日悬浮培养类似微生物的深层培养。由于是悬浮生长，细胞密度一般都较高，培养的效率也高、操作也容易。这种方法有多方面的优越性，易于大规模生产，便于过程的控制。可惜能在悬浮状态下生长的细胞种类有限，且不太方便观察。第29页，共45页，星期日，2025年，2月5日3.2动物细胞培养

的基本技术

第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日3.2.1体外培养的条件

3.2.1.1与微生物细胞培养相比动物细胞培养的特殊性大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长。动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需要血清。第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括pH、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。动物细胞生长缓慢，因此培养时间较长。对环境的影响又比微生物为大，因此常用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日培养条件TemperaturepHDissolvedgasNutrients第33页，共45页，星期日，2025年，2月5日培养基20世纪40年代以后，从事动物组织培养的各国科学家把研究的重点集中在培养基的改造上。1951年，Earle等人开发了供动物细胞体外培养的培养基。MediaThechoiceofmediaiscelltypespecificandoftenempirical-noallpurposemedium.Shouldprovide:nutrients,bufferingcapacity,isotonic,andbesterile第34页，共45页，星期日，2025年，2月5日第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日第3章动物细胞与组织培养第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日动物的细胞与组织培养定义：从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理环境，在体外建立无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日1动物细胞培养群体培养（massculture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层克隆培养（clonalculture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日群体培养（左）和克隆培养（右）第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日DefinitionsofTissueCultureTerms

cellculture-themaintenanceandgrowingofdispersedcellsoutsidetheorganism.Secondaryculture－Cellstakenfromaprimarycultureandpassedordividedinvitro.Thesecellshavealimitednumberofdivisionsorpassages.tissueculture-themaintenanceofatissueorfragmentinawaythatmayallowdifferentiationandpreservationofthearchitectureand/orfunctionmonolayer-singlelayerofcellsgrowingonasurfaceorganculture-maintenanceoftissues,wholeorpartsoforgansinawaythatmayallowdifferentiationandpreservationofthearch