微生物实验室质量控制2009.pptVIP

常用菌种的保藏方法 ? 5 、液氮保藏法 ? 保存：制备菌悬液，用甘油或二甲亚砜作保 护剂，分装安瓿，每管 0.5ml ，预冻至 -40 ℃ （控制温度下降速率为1℃/min)，放入液氮 生物贮存罐中保存。 ? 恢复：直接浸入38℃水浴中解冻 5 ～ 10min ， 转种于适宜培养基内培养。 ? 注意：大多数属种适于慢速冻结和快速冻结。 蒸馏水保藏法 ? 6 、蒸馏水保藏法 ? 在斜面培养基上加无菌蒸馏水 5 ～ 6ml ，用吸 管轻轻吹散表面菌苔，移入灭菌螺旋口小试 管中，盖严盖子在室温保存。 ? 霉菌、酵母和放线菌、植物病原菌可在室温 保存数年。 培养基的分类 ? 保存培养基；在一定期限内保护和维持微生 物活力，或使微生物在长期保存后容易复苏 （如卵黄培养基）。 ? 复苏培养基：能够使受损或应激的微生物修 复、使微生物恢复正常生长能力，但不促进 微生物繁殖的培养基（如缓冲蛋白胨水）。 ? 增菌培养基（选择性：如胆盐乳糖增菌液、 非选择性：如营养肉汤）。 培养基的分类 ? 分离培养基 ? 选择性分离培养基：支持特定微生物的生长 而抑制其他微生物生长（如胆盐硫乳琼脂） ? 非选择性分离培养基：对微生物没有选择性 的抑制作用（如营养琼脂） ? 鉴别培养基：能够进行一项或多项微生物生 理学或生化特性鉴定试验（如三糖铁琼脂） ? 鉴定培养基：能够产生一个特定的鉴定反应 而不需要做进一步确认实验的培养基（如 MUG 培养基） 培养基的质量保证 ? 生产企业提供的材料： ? 培养基名称、各种成分和增补剂名称、产品 批号。 ? 培养基使用前的 PH 值。 ? 储藏条件和有效期。 ? 技术数据清单。 ? 质控证书（性能评价和所用的测试菌种）。 ? 必要的安全及危害数据。 培养基的质量保证 ? 实验室验收： ? 保存有效的培养基目录清单。 ? 包装情况和完整性。 ? 培养基的名称和批号。 ? 接收日期、有效期。 ? 首次开封日期。 ? 内容物的感官检查 ( 粉末的流动性、均匀性、 结块情况和颜色变化 ) 。 培养基的储存 ? 例行常规检查（干粉培养基）： ? 容器密封性复查；首次开封日期；内容物感 官检查。 ? 使用前检查（商业性培养基）： ? 颜色是否发生变化？是否蒸发 / 脱水？ 是否 有微生物污染？ ? 严格按照供应商提供的储藏条件、有效期和使用方 法进行培养基的保存和使用。 ? 有计划购买，先购先用。 培养基的储存 ? 成品培养基（系指配好待用的培养基 , 下同） ? 已分装好的培养基：避光、冷藏。 ? 最终成分在使用前加入的培养基，冰箱保存 不超过三个月，室温保存不超过一个月。 ? 不稳定的选择性添加成分应在培养基制备的 当天使用。 ? 观察任意颜色变化，记录培养基蒸发或微生 物生长情况。 培养基的实验室制备 ? 使用商品化的脱水合成培养基时，应严格按 照厂商提供的使用说明配置，如重量 / 体积、 PH 值、制备的数据、灭菌条件、操作步骤。 ? 使用独立成分制备培养基时，按配方准确配 置并记录配置步骤。 培养基的实验室制备 ? 水：要求使用蒸馏水或相同质量的水，不含 有抑制或影响微生物生长的物质。 ? 称量和复水：防止培养基结块。 ? 溶解和分装：适当加热重复搅拌。 ? pH 值的测定和调整：使用 pH 计。 1mol/L 的氢氧化钠溶液或 1mol/L 的盐酸溶液 进行 pH 值的调整。 培养基的实验室制备 ? 分装 ? 灭菌 ? 湿热灭菌：按使用说明规定进行 ，监控高压 灭菌过程，保证灭菌温度，避免过度加热。 ? 过滤除菌：真空负压或正压条件下进行，滤 膜和滤垫除菌。滤器 121 ℃ 灭菌 20 分钟。 培养基的使用 ? 琼脂培养基的融化 避免过度加热，融化后 的培养基应尽快使用，不要放置超过 4 小时。 ? 对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至 48 ℃ ± 2 ℃ 时加入。 ? 平板培养基的保存：暗处存放一周或 4 ℃～ 12 ℃ 冰箱密封袋，存放三周或按厂商提供标 准进行。作好标记（名称、制备日期、有效 期）。 ? 平板冷却后装袋避免产生冷凝水。 培养基的使用 ? 平板培养基的培养 每垛最多堆放六个平板，平板间要留有空隙 进行空气流通，使温度尽快达到一致。 ? 培养基的弃置 ? 所有污染和未使用的培养基的弃置必须采用安全的 方式，并且要符合相关法规（废弃物处理程序）的 规定。 成品培养基的质量控制 ? 物理质量的控制 ? 20 ～ 25 ℃ 时的 pH 值。 ? 液体培养基：外观透明、清亮、无混浊、无 沉淀。 ? 固体培养基：具有特定颜色、表面湿润无水 气、平整光洁无凹坑和气泡、无杂质 厚度 3 ～ 4mm 。 成品培养基的质量控制 ? 无菌实验 ? 压力蒸汽灭菌后的固体培养基，随机抽取一 定数量放 36 ℃ ± 1 ℃