生化制品检测技术降纤酶的检测11课件.pptxVIP

生化制品检测技术降纤酶的检测

2降纤酶的工艺路线（一）

从蛇毒提取降纤酶的工艺流程如下。降纤酶的工艺路线（一）

12345灭活金属蛋白酶透析层析凝胶过滤制剂降纤酶的结构和性质

（1）灭活金属蛋白酶：取200mg蝮蛇粗毒，溶于0.005mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲液中（内含1×10-2mol/LEDTA），使粗毒中所含的金属蛋白酶失活。（2）透析：将灭活金属蛋白酶后的蛇毒溶液装入透析袋中，置含1×10-4mol/LEDTA的同一磷酸盐缓冲液中，充分透析平衡。（3）层析：取EDTA-纤维素柱-52（1.5cm×14cm），先用上述磷酸盐缓冲液平衡后，将透析液上柱，加以不同浓度的氯化钠作线性梯度洗脱，流速20mL/h，每管收集3.6mL；先用0.005mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲液250mL与等体积内含0.1mol/L氯化钠的同一缓冲液作梯度洗脱，然后用含0.1～1.0mol/L氯化钠的同一缓冲液作第二级梯度洗脱。层析图谱第一个蛋白峰含有磷酯酶A活性。此后有三个精氨酸酯酶活力峰，收集降纤酶活性部分。将降纤酶洗脱液透析除盐，装瓶、冻干，即得降纤酶粗品。降纤酶的工艺路线（一）

（4）凝胶过滤：取粗品20mg溶于0.02mol/L的碳酸氢钠溶液（内含0.2mol/L氯化钠）1mL中，上SephadexG-75柱（1.3cm×150cm），以同一溶液洗脱，流速20mL/h，每管收集1.6mL。合并含降纤酶活性的洗脱液，得精品。（5）制剂：在降纤酶溶液中加适量稳定剂和赋形剂，冻干，得注射用降纤酶。降纤酶的工艺路线（一）

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