任务8微生物制片染色技术李宝玉副教授56课件.pptx

任务8微生物制片染色技术李宝玉副教授开始学习广东农工商职业技术学院

目录CONTENTS1细菌简单染色2细菌革兰氏染色

01细菌简单染色

染色任务准备——知识准备为了完成任务，获取所需的相关知识，需完成的思考题：说出简单染色的原理、目的细菌染色意义？为什么常用碱性染料进行简单染色？什么是简单染色法？它的步骤是什么？固定的目的和方法？什么是革兰氏染色？革兰氏染色法的原理是什么？革兰氏染色液包括什么？革兰氏染色的步骤是什么、参数？媒染的作用？去掉媒染染色结果？影响革兰氏染色因素

细菌简单染色任务描述某检验机构接收到受污染的食品，经初步判断可能是被大肠杆菌污染，在鉴定试验过程中发现了可疑菌落，需要对其进行染色观察，这个环节由你们来完成。

细菌简单染色任务要求完成本学习任务后，你应该能：1、说出简单染色的原理、目的；2、学会简单染色技术；3、学会火焰灭菌等无菌操作技术；4、不断增强无菌观念；5、具有严谨的科学实验态度和科学探究精神。

细菌简单染色任务准备——知识准备为了完成任务，获取所需的相关知识，需完成的思考题：1、细菌染色意义？2、为什么常用碱性染料进行简单染色？3、什么是简单染色法？它的步骤是什么？

细菌简单染色任务准备——知识准备1、细菌染色意义？细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。

细菌简单染色任务准备——知识准备2、常用碱性染料进行简单染色？因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。

细菌简单染色任务准备——知识准备简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红等）使其着色。

细菌简单染色任务实施涂片干燥固定染色1min水洗、吸干镜检制备涂片标本→染色注意无菌操作简单染色

细菌简单染色任务准备——技能准备简单染色法

细菌简单染色任务实施实训细菌的简单染色实验器材1、菌种：培养12-16h的枯草杆菌（Bacillussubtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichiacoli）2、染色液和试剂：美蓝（或复红）、甘油、无菌水3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜、火柴、滤纸、酒精棉、搁架等。

细菌简单染色任务实施涂片干燥固定染色1min水洗、吸干镜检制备涂片标本→染色注意无菌操作简单染色

细菌简单染色提示与警告1、小心酒精灯火焰，酒精过少时及时添加酒精，注意不要点燃其它物品！2、所用染料一旦染上衣物，很难洗净！3、载玻片在火焰上太久，可能碎裂！4、固体培养基上的细菌容易粘在一起，必须用水充分分散，否则会涂片太厚或不均匀！5、细菌用量不要太多，否则实验易失败！6、接种环过热可能会使培养基飞溅，事细菌飘到空气中！7、用过的接种环必须火焰灼烧！8、用过的载玻片请放在盛有消毒液的容器中，需要灭菌后才能洗涤！

细菌简单染色任务反馈1、固定的目的和方法？2、染色过程中哪些体现了无菌操作？3、实验完毕后的处理？

细菌简单染色任务反馈固定的目的和方法？使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固加热固定可杀死细菌，比较安全可改变菌体对染料的通透性固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次

细菌简单染色染色过程中哪些体现了无菌操作？

细菌简单染色任务反馈实验完毕后的处理?①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的甘油擦去。b.用擦镜纸沾少许水将镜头擦2-3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。③观察后的染色玻片，放入回收容器内。④清理实验台，归还实验物品。

细菌简单染色任务描述实验室两管菌种，分别是大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，请你通过染色的方法进行菌种的鉴别。

02细菌革兰氏染色

细菌革兰氏染色任务准备——知识准备为了完成任务，获取所需的相关知识，需完成的思考题：什么是革兰氏染色？革兰氏染色法的原理是什么？革兰氏染色液包括什么？革兰氏染色的步骤是什么、参数？媒染的作用？去掉媒染染色结果？影响革兰氏染色因素

细菌革兰氏染色任务准备——知识准备革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法。（是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。）因为通