细胞生物学技术一.ppt

*细菌和真菌的清除使用抗生素抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好，一般用双抗生素。污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍药物冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。第96页,共105页，星期六，2024年，5月*95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）精氨酸支原体（M.arginini）猪鼻支原体（M.hyorhinis）牛莱氏无胆甾原体（A.laidlawii）危害：世界性问题，平均发生率达到11%能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达不能通过可视法对其进行检测对细胞的生长率影响较小，不易引起注意污染来源：操作环境不良操作人员的疏失实验器具不洁等已受污染的细胞已受污染的培养基、血清支原体污染第97页,共105页，星期六，2024年，5月*荧光染色法电镜检查：扫描电镜、透射电镜支原体培养聚合酶链反应(PCR)法支原体污染检测第98页,共105页，星期六，2024年，5月*细胞营养液常常仍清亮但变黄,细胞生长变缓，部分细胞发生脱落等等，细胞间隙可见铺满细沙样小点。支原体污染表现荧光染料Hoechst33258染色法检测支原体第99页,共105页，星期六，2024年，5月*支原体的清除支原体清除剂MRA（Mycoplasma?Removal?Agent）处理法每4天换一次液，连续处理15天清洗纯化法细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤原理：由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生，所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限.如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。?药物辅助高温处理法先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。支原体特异性血清法用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。

第100页,共105页，星期六，2024年，5月*细胞运输1.保存在干冰或液氮中运输；2.培养在瓶中:当细胞生长至50％汇合，瓶中充满培液，瓶口封紧，运输途中培养瓶最好呈直立状。细胞带至培养室后，在确保无污染的情况下立即开封，用酒精消毒瓶口和瓶身，吸出多余的培养液后将培养瓶平躺在培养箱内。吸出的培液置于无菌容器中,可用于同一种细胞的培养。第101页,共105页，星期六，2024年，5月*血清的作用

1.血清中含有许多营养物质如：蛋白、激素、生长因子、细胞因子、维生素等；2.血清是很好的缓冲系统；3．含有转运蛋白，如转铁蛋白、铜蓝蛋白等；4．含有贴壁因子或粘附蛋白如纤粘连蛋白、胎球蛋白等可以帮助细胞贴壁；5．对于重金属有解毒的作用。?第102页,共105页，星期六，2024年，5月*血清的缺点1.血清成分复杂，不利于从培液中提取产物；2.有些物质能干扰实验结果，如受体和C3片段的检测；难以研究各种因子作用的机制;3.血清能促使成纤维细胞过量生长，故对上皮细胞培养不利;4.每批血清中成分不同，可以影响实验的结果，包括贴壁率等；5.易污染支原体。?第103页,共105页，星期六，2024年，5月*无血清培养的优点1．便于研究激素、生长因子、细胞因子、维生素等对细胞生长和分泌功能的作用及其作用机理包括信号通路等。2．作为选择性培养基，便于从原代培养细胞中选择目的细胞类型和较纯的上皮细胞。3.消除不同批号引起实验结果的不一致。5．基因工程和细胞工程产物的后处理简单。6．用于追踪肿瘤细胞的扩散。7.细胞工程临床治疗中降低免疫排斥。第104页,共105页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第105页,共105页，星期六，2024年，5月**细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形

态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条

件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生

了。

虽