磁性微球分离技术与离子交换色谱.pptxVIP

《磁性微球与离子交换分离纯化生物大分子》

Part1基于磁性微球吸附的DNA纯化Part2离子交换色谱在蛋白质分离中的应用

磁性微球吸附纯化DNA

从复杂生物样品中分离纯化核酸或者制备核酸模板是许多分子生物学技术中的关键步骤。由于样品基质中存在大量的细胞裂解产物如蛋白质和其他杂质，它们可能抑制下游处理中使用的聚合酶和限制性内切酶的活性，也可能导致目标核酸的降解，因此，在进行核酸测序、扩增、杂交、酶切等操作之前都需要首先采取适当的方法将核酸从混合物中分离出来。常规的核酸提取方法涉及细胞裂解、有机溶剂萃取、沉淀和离心等步骤。这个过程费时费力，不易自动化。而新近发展起来的基于磁性微粒的固相提取方法使得核酸纯化过程大为简化，已经在欧美国家获得了广泛的应用！

磁性微球吸附纯化DNA

种类大致以下几种：二氧化硅磁性微球脲醛树脂磁性微球聚苯乙烯磁性微球四氧化三铁磁性纳米微球g-Fe2O3磁性微球

磁性微球吸附纯化DNA

原理大多数的磁性微球分别以球形脲醛树脂、二氧化硅和聚苯乙烯为基质，通过在其中均匀分散纳米磁性氧化铁制备而成，具有粒径分布均匀、磁场中沉降速度一致和超顺磁响应性等特点。在磁性微球表面通过化学修饰结合上一系列不同的化学官能团及具有特异性的抗体、蛋白和核酸，可应用于核酸纯化、细胞筛选、免疫分析、临床诊断等多个领域，是医学、分子生物学研究中不可或缺的分离纯化工具。

磁性微球吸附纯化DNA

优点基于磁性微粒的核酸纯化技术是利用亲水性磁性微粒吸附样品溶液中的核酸分子，在外加磁场作用下将负载核酸的磁性微粒从样品溶液中分离出来，经适当清洗后，加入适当的溶液使得核酸从磁性微粒上脱附即得到纯化核酸。核酸纯化步骤不仅可以在常规的试管中以手工方式进行，也可以在96孔或382孔微孔板中以自动化方式进行。这些新型仪器使得核酸纯化的基本步骤实现了自动化，无需进行乙醇沉淀、苯酚/氯仿萃取、离心和柱层析处理，从而避免连续重复的手工抽提，不仅减少了样品损失与污染，还极大地提高了样品处理的通量。基于磁性微粒的核酸分离纯化试剂盒以其操作简便快捷和省时省力的特点，成为目前分子生物学和临床医学研究的理想的辅助工具。

磁性微球吸附纯化DNA

目前已经有基于磁性微球技术纯化核酸与蛋白质的试剂盒。一次操作的时间大约为1-2个小时。纯化回收率约为80%以上。其A280/260值在1.7-2.0之间，可直接应用于后续核酸操作如PCR或酶切。具体制备步骤较复杂，建议直接购买制作好的

磁性微球吸附纯化DNA

应用实例：

离子交换色谱在蛋白质分离中的应用

离子交换色谱在蛋白质分离中的应用离子交换制备鸡蛋清中的溶菌酶：

离子交换色谱在蛋白质分离中的应用洗脱浓度：洗脱时间：

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