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饲料中违禁物质检测第3部分：大环内酯类

1范围

本文件规定了饲料中罗红霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙毒素、竹桃毒素、红霉素6种大环内酯

类药物测定的高效液相色谱-串联质谱法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料中罗红霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙毒素、竹桃毒素、红霉

素6种大环内酯类药物的测定。

本方法检出限为5μg/kg，定量限为10μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

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文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

用乙腈提取样品中大环内酯类药物，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有说明，在分析中所用试剂均为分析纯和符合GB/T6682规定的一级水。

5.1乙腈（CHCN，75-05-8）：色谱纯。

3

5.2甲酸（HCOOH，64-18-6）：色谱纯。

5.3甲醇（CHOH，67-56-1）：色谱纯。

3

5.40.1mol/L氢氧化钠溶液。

称取4.0g氢氧化钠，并用水稀释至1L，摇匀。

5.5磷酸盐缓冲溶液：0.1mol/L。

称取6.0g磷酸氢二钠溶解于450mL水中，用氢氧化钠调节pH=8，用水定容至500mL，摇匀。

5.60.1%甲酸溶液。

准确吸取甲酸（5.2）1mL加水至1000mL，摇匀。

5.70.1%甲酸-乙腈溶液。

0.1%甲酸溶液（5.6）+乙腈（5.1）=50+50，摇匀。

5.8标准储备溶液：1.0mg/mL。

1

准确称取罗红霉素（CAS编号：80214-83-1，纯度≥95%）、替米考星（CAS编号：108050-54-0，

纯度≥95%）、泰乐菌素（CAS编号：1401-69-0，纯度≥95%）、交沙霉素（CAS编号：16846-24-5，纯

度≥95%）、竹桃霉素（CAS编号：7060-74-4，纯度≥95%）、红霉素（CAS编号：114-07-8，纯度≥95%）

标准品各约10mg（精确至0.01mg），分别置于10mL容量瓶中，用乙腈溶解定容。

于-18℃以下保存，有效期为3个月。

5.9标准中间溶液。

准确吸取适量标准储备溶液（5.8），用乙腈配制成浓度为10µg/mL的标准中间溶液。

4℃保存，有效期为1个月。

5.10标准工作液。

用空白样品提取液分别配成浓度为1ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL的标准工作

溶液，现用现配。

5.11聚苯乙烯二乙烯基苯吡咯烷酮填料固相萃取柱或者相当者：60mg/3mL。

6仪器设备

6.1高效液相色谱-串联质谱仪：三重四级杆质谱检测器，配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。

6.3离心机：转速不低于8000r/min。

6.4固相萃取装置。

6.5氮吹仪。

6.6涡旋振荡器。

6.7微孔滤膜：0.22μm，有机系。

7样品

按照GB/T20195的规定，选取有代表性的样品，粉碎使之完全通过0.42mm孔径的分析筛，装入磨

口瓶，密封保存备用。

8试验步骤

8.1提取

平行做两份试验，准确称取2g试样（精确至0.01g）置于50mL离心管中，准确加入10mL乙腈（5.1），

涡旋，超声提取10min，于8000r/min离心10min。准确移取上清液2mL，加入10mL磷酸盐缓冲溶液（5.5），

涡旋混匀，备用。

8.2净化

固相萃取柱（5.11）预先依次用3mL甲醇（5.3），3mL水，3mL磷酸盐缓冲液（5.5）活化。移取

提取液（8.1）过固相萃取柱，用3mL水淋洗，弃去全部流出液。用3mL甲醇（5.3）洗脱，收集洗脱液。

将洗脱液50