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布舍瑞林的合成 布莱林是合成激素（lhrh）的类似物质，由9个氨基酸组成。化学名称为l-焦氨基丙烯酸l-氨基丙烯酸l-氨酰-l-酪氨酸苯乙烯酸酯d-（o-叔叔丁基）-氨基丙烯酸l-氨酰-l-l-氨酰-l-氨酰-l-氨酰-l-氨酰-l-氨酰-l-氨酰-l-氨基酸丙烯酸酯，c60h861.13，相对分子量12439。4.结构和lhrh之间的区别在于，后者的6-位和10-位的gly残基被d-ser（tu）-h和乙胺取代。参见分子方程式和氨基酸序列。 布舍瑞林短期、小剂量给药时对垂体性腺系统起促进作用, 用于治疗性功能低下、不排卵、青春期延缓;长期、大剂量给药时, 可抑制垂体分泌黄体生成素 (LH) 和卵泡刺激素 (FSH) 导致性腺分泌激素能力下降, 性器官萎缩, 用于治疗一些激素依赖性疾病如前列腺癌、乳腺癌及子宫内膜异位症等, 给药途径为经鼻和皮下注射。布舍具有很高的药用价值和广阔的市场前景。 布舍瑞林现有的制备方法主要是液相合成法, 但操作复杂, 不利于工业生产。目前国内报道的利用多肽固相合成法制备布舍瑞林的文献较少。本研究采用固相与液相相结合的多肽合成法, 采用对酸不稳定的2-氯三苯基氯树脂 (2-CTC树脂) , 利用N, N-二异丙基碳二亚胺 (DIC) 与1-羟基苯并三氮唑 (HOBT) 为缩合剂, 逐步缩合得到布舍瑞林中间体肽树脂, 用低浓度的酸裂解得到全保护的布舍瑞林中间体, 然后再液相中接乙胺实现N-端修饰、再经催化氢化脱除精氨酸侧链的硝基 (NO2) 和酪氨酸侧链的苄基 (Bzl) , 选择合适浓度的酸脱除三苯甲基 (Trt) 保护基而保留D-丝氨酸 (D-Ser) 的叔丁基 (tBu) 后获得粗肽, 最后经半制备纯化, 冻干获得高纯度的布舍瑞林。合成工艺流程见图2。 实验部分 1 仪器、药品和调湿器 Agilent Technologies 1200型高效液相色谱仪 (UV检测器, 美国Agilent公司) ;Newstyle型反相高效半制备液相色谱仪 (苏州汉邦科技有限公司) ;Heal Force纯水机 (香港力康公司) ;LGJ 18型冷冻干燥机 (北京松源华兴科技发展有限公司) ;TDL 40B型高速离心机 (上海安亭科学仪器厂) ;Spectrum 752型紫外分光光度计 (上海光谱仪器有限公司) ;AR224CN型分析天平 (美国奥豪斯仪器上海有限公司) ;RE 52AA型旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂) 。 2-氯三苯甲基氯树脂 (CTC树脂, 替代度为0.90mmol·g-1, 天津南开合成科技有限公司) ;Fmoc保护的氨基酸包括Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Arg (NO2) -OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-D-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Tyr (Bzl) -OH, Fmoc-Ser-OH, Fmoc-Trp-OH, Fmoc-His (Trt) -OH, Pyr均购自成都诚诺新技术有限公司;缩合试剂1-羟基苯并三氮唑 (HOBT) , 苯并三唑-1-氧三吡咯烷膦鎓六氟磷酸盐 (PyBOP) , N, N-二异丙基碳二亚胺 (DIC) , N, N-二异丙基乙胺 (DIEA) 由苏州中科天马肽工程中心有限公司提供;哌啶, 三氟乙酸 (TFA) , 甲醇, 二氯甲烷 (DCM) , N, N-二甲基甲酰胺 (DMF) , 乙胺盐酸盐, 冰乙醚, 甲酸铵, 10%Pd/C, 间甲酚均为分析纯;乙腈 (色谱纯, 天津永大化学试剂有限公司) , 超纯水 (实验室自制) 。 2 方法 2.1 fmoc-pro-ctc树脂的制备 将2.222g (2mmol) CTC树脂倾入反应柱中, 用DMF溶胀0.5h, DMF洗涤 (20mL×3, 每次1min) 后, 抽干。将1.350g (4mmol) Fmoc-Pro-OH, 2mL (12mmol) DIEA用20mL DMF在冰浴下溶解后投入反应柱中, 氮气均匀吹拂室温下反应1.5h, DMF洗涤 (20mL×3, 每次1 min) , 除去过量氨基酸, 制得Fmoc-Pro-CTC树脂。加入20mL甲醇封闭液 (体积比为DCM∶甲醇∶DIEA=80∶15∶5) 封闭2次, 每次10 min, 抽干, DMF洗涤 (20 mL×3, 每次1min) , 无水甲醇洗涤 (10mL×3, 每次5min) , 减压干燥至恒重, 取少量树脂进行替代度检测。 2.2 替代度和吸光度测定 精密称取干燥至恒重的Fmoc-Pro-CTC树脂2份, 各10.0mg, 分别置于2mL离心管中, 向离心管中加入1mL 20%的哌啶/DMF溶液, 室温振荡20min, 脱去Fmoc保护基。从离心管取200μL溶液置于10mL比色管中, 用