反相hplc法测定莲子心水溶性季铵生物碱莲心季铵碱的含量.docxVIP

反相hplc法测定莲子心水溶性季铵生物碱莲心季铵碱的含量 莲心季铵碱是传统中医莲心（学名：蒲尔迈诺基亚、睡莲科植物的莲心维隆姆，成熟种子的绿色胚胎）的水生单胞菌类碱。它被鉴定为含有1-羟色胺-6-羟基-7-10羟基色胺（对羟基）的10-羟色胺（对羟基）。我已经告诉你分析了波谱数。莲子心为2005版《中华人民共和国药典》收载品种, 对它的成分定量控制目前只有脂溶性双苄基异喹啉类生物碱——莲心碱 (Lien) 。药理研究表明, Lot明显增加离体心肌收缩力, 但对心率却无明显增快作用, 其正性肌力作用略强于氨吡酮;它还能扩张血管, 提高血小板环核苷酸的含量, 也能提高心肌及阴茎海绵体的环核苷酸含量, 具有磷酸二酯酶 (PDE) Ⅲ抑制剂的性质;其正肌作用机制除与PDE Ⅲ抑制有关外, 还与延长动作电位时程, 促钙内流有关。必威体育精装版研究还表明, Lot可改善失血性休克大鼠的心功能障碍, 增加心输出量, 减轻失血性休克大鼠的细胞损伤, 提高大鼠的存活率, 对失血性休克大鼠有较好的保护作用。有鉴于此有必要对药材莲子心中水溶性生物碱——Lot进行定量分析。 有关对莲子心中Lot含量测定的报道极少, 我们曾用两种反相HPLC法同时测定莲心碱、异莲心碱 (Iso) 、甲基莲心碱 (Nef) 和莲心季铵碱的含量, 其中一种方法的流动相碱性很强(pH 10.5) , 运用时严重影响色谱柱的寿命;另一种方法采用离子对试剂进行测定, 对Lien、Iso和Nef分离良好, 但由于Lot保留时间 (tR) 较短 (约4 min) 的缘故, 使其与杂质峰不能得到较好分离。本实验建立专属的反相HPLC法测定10批莲子心中Lot的含量。 1 仪器和试剂盒 1.1 仪器和检测方法 LC-10 AT系列高效液相色谱仪 (日本Shimadzu公司) , 包含LC-10 AT (双) 泵、CBM-10A系统控制器、7255α手动进样阀、SPD-10 A紫外检测器和CLASS-LC 10化学色谱工作站, ERC-3415α四通道在线脱气机 (日本SHODEX公司) , AT-530柱温箱 (天津AUTOSCIENCE公司) , UV 2401紫外分光光度计 (日本岛津公司) , AE 240电子天平 (0.01 mg, 瑞士METTLER TOLEDO公司) , KQ-500DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司, 最大功率:500 W) , SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器 (金坛市国胜仪器厂) , HH-6数显恒温水浴锅 (常州国华电器有限公司) 。 1.2 可溶性种子分子中hplc表达的确定 对照品:莲心季铵碱 (自制) , 从睡莲科植物莲 (Nelumbo nuciferaGaertn.) 成熟种子绿色胚芽的水溶性部位获得, 经UV、IR、1HNMR、13CNMR和MS确定结构, 经HPLC归一化法分析纯度达98.0 %以上。 乙腈为HPLC专用试剂, 水为重蒸水, 醋酸铵和甲醇均为分析纯。 1.3 药用菌鉴定结果 10批莲子心来源于不同的产地和厂家, 经南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所潘扬研究员鉴定均为睡莲科植物莲Nelumbo nuciferaGaertn. 成熟种子的绿色胚芽。 2 方法和结果 2.1 对照溶液的制备 精密称取Lot 5.50 mg, 置5 mL量瓶中, 加甲醇适量使溶解并稀释至刻度, 作为各对照品储备液置4 ℃下冷藏。 2.2 检测波长的确定 取稀释后Lot对照品溶液, 分别在紫外分光光度计上进行全波长 (400～190 nm) 扫描, 发现它在波长228 nm和282 nm处均有吸收峰, 由于228 nm接近于溶剂甲醇的紫外最大吸收, 容易形成干扰, 因此确定检测波长为282 nm。 2.3 甲醇提取液制备 取莲子心 (粉碎, 过60目筛) 0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加甲醇30 mL, 混匀, 先密塞放置30 min, 然后在75～80℃水浴中回流提取30 min, 放冷, 摇匀, 过滤, 滤液加甲醇定容至50 mL, 精密量取甲醇溶液1 mL, 再加甲醇稀释至5 mL, 摇匀, 用0.45 μm滤膜滤过, 即可。 2.4 a/b条件下合成醋酸铵 色谱柱:Hedera ODS-3 C18柱 (5 μm, 4.6 mm×250 mm) , 江苏汉邦科技有限公司, 批号:B 1810405. 25;流动相:以0.4%醋酸铵水溶液 (A) -0.4%醋酸铵50%乙腈水溶液 (B) 梯度洗脱:0～15 min (25 % B) , 15～45 min (25%B→100 % B) , 45～50 min (100 % B →25 % B) , 运行时间:60 min, 体积流量:1.0 mL/min;柱温:30