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hplc测定湘莲莲心生物碱的含量 莲花心是睡莲科植物的一种古老的植物，具有净化心脏、运输心脏、减少涩精等功效。用于热入心包,神昏谵语,心肾不交,失眠遗精,血热吐血。莲子心中生物碱包括莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱等,是莲子心的主要药效成分,具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集、抗脂质过氧化及清除自由基、抗癌等药理作用。“湘莲”,又称寸三莲,在历史上被称为“贡莲”,种植历史悠久,产量高,质量优良,驰名中外,饮誉古今。采用HPLC测定6个不同产地湘莲莲子心中莲心碱的含量,对湘莲莲子心中莲心碱的含量进行了分析。 1 仪器和试剂盒 1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津LC-10ATVP);岛津SPD210Avp紫外可见检测器;分析天平(十万分之一,赛多利斯BP211D)。 1.2 种子对照品和乙醇 莲子心购于湖南各地,经鉴定为莲Nelumbo nuciferaGaerth.种子干燥的幼叶和胚根;莲心碱高氯酸盐对照品(批号:111686-201101,购于中国食品药品检定研究院);水为超纯水;乙醇为95%医用乙醇;甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 流动相、检测波长 色谱柱为ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸钠-冰醋酸(56∶43∶1);体积流量为1 mL·min-1;检测波长为282 nm;温度为室温;进样量为10 μL。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照品贮备溶液的配制 精密称取莲心碱高氯酸盐对照品11.000 0 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,制成0.220 0 mg·mL-1的对照品贮备溶液。精密吸取贮备溶液5 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成浓度为0.110 0 mg·mL-1的对照品溶液。 2.2.2 续溶液的制备 取不同产地的莲子心粉末(过四号筛)适量,精密称定,精密加入2%盐酸甲醇溶液25 mL,称定重量,加热回流30 min,放冷,再称定重量,用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,用0.22 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。 2.3 相色谱法 分别吸取莲心碱对照品溶液及供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪。在此条件下,莲心碱峰达到基线分离,理论板数以莲心碱峰计不低于5 000,HPLC图见图1、2。 2.4 标准线性回归分析 分别精密吸取2.2.1项下对照品溶液1,3,5,7,9,11 μL进样,测定峰面积。以峰面积Y为纵坐标,进样量X为横坐标进行线性回归,得回归方程:Y=1.4×106X+1 339.3,r=0.999 5。结果表明莲心碱在进样量范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.5 仪器精密度试验 精密吸取2.2.1项下莲心碱对照品溶液10 μL,按2.1色谱条件下,连续进样6次并测定峰面积,莲心碱的RSD=0.31%,结果表明仪器精密度良好。 2.6 进样峰面积测定 取湘潭产寸三莲莲子心粉末6份,按2.2.2项下方法操作,在上述色谱条件下,各取10 μL进样,测定峰面积。计算得莲心碱的平均含量为0.32%,RSD=0.95%,结果表明该方法重复性好。 2.7 进样峰面积测定 精密吸取同一供试品溶液10 μL,按上述色谱条件,分别于制备后0,2,3,8,10,12 h进样,测定峰面积。计算得莲心碱RSD=1.04%,表明溶液中莲心碱在12 h内稳定。 2.8 加样回收率测定 称取已知含量的莲子心粉末(莲心碱含量为0.32%)0.5 g,精密称定,共6份,分别精密加入已知含量的莲心碱对照品贮备溶液5 mL,每份按2.2.2项下方法操作,在上述色谱条件下,各取10 μL注入高效液相色谱仪,依法测定,计算回收率,结果见表1。 2.9 莲子含莲心碱含量测定 分别精密吸取各供试品溶液10 μL注入高效液相色谱仪,记录色谱峰面积,计算莲子心中莲心碱的含量。6个不同产地的莲子心中莲心碱的含量测定结果见表2。 3 不同产地的莲子莲心碱含量状况 文中采用高效液相色谱法对湘莲莲子心中的莲心碱碱含量进行了测定。湘莲品种主要有湘潭寸三莲、杂交莲,华容荫白花,汉寿水鱼蛋,耒阳大叶帕,桃源九溪江、衡阳的乌莲等。经测定,6个不同产地的湘莲莲子心中莲心碱的含量均大于0.2%,符合《中国药典》2010版规定的要求。6个产地的莲子心中莲心碱的含量相差不大,其中湘潭产莲子心中莲心碱的含量最高,为0.32%。 在对莲子心进行含量检测时,《中国药典》2010版规定是以莲心碱含量作为莲子心质量控制的指标,但是莲子心异莲心碱、甲基莲心碱同样具有明确的药理作用。从6个供试品的谱图中可以看出莲子心中异莲心碱和甲基莲心碱的峰面积都要大于莲心碱的峰面积。