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ICS 65. 120B 40NY中华人民共和国农业行业标准NY 438-2001饲料中盐酸克仑特罗的测定Determination of clenbuterol hydrochloride in feed2001-05-01实施2001-02-12 发布中华人民共和国农业部发布
NY 438--2001前言盐酸克仑特罗,其化学名称为α-[(叔丁氨基甲基}-4-氨基-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐,俗称克喘素,是一种β2肾上腺素受体激动药,属国家禁止在饲料中使用的药物。本标准是在参阅欧盟有关的推荐方法和国内外文献的基础上,经大量实验研究制定的。本标准规定了以高效液相色谱(HPLC)法和气相色谱-质谱(GC-MS)法测定饲料中盐酸克仑特罗的方法,规定GC-MS法为仲裁法。本标准由全国饲料标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料产品质量监督检验中心(北京)负责起草,北京师范大学分析测试中心参加起草。本标准主要起革人:常碧影、范理、阎惠文、宋荣、李新新、李兰。306
中华人民共和国农业行业标准NY 438--2001饲料中盐酸克仑特罗的测定Determination of clenbuterol hydrochloride in feed1范围本标准规定了以高效液相色谱(HPLC)法和气相色谱-质谱(GC-MS)法测定饲料中盐酸克仑特罗的方法,规定GC-MS法为仲裁法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸克仑特罗的测定与仲裁。HPLC法的最低检测限为 0. 5 ng(取样 5 g 时,最低检测浓度为 0. 05 mg/kg)。GC-MS 法最低检测限为 0. 025 ng(取样5 g时,最低检测浓度为0.01mg/kg)。2 引用标准下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准新版本的可能性。GB/T6682--1992:分析实验室用水规格和试验方法3 HPLC 法3.1方法原理用加有甲醇的稀酸溶液将饲料中的克仑特罗盐酸盐溶出,溶液碱化,经液液萃取和固相萃取柱净化后,在HPLC仪器上分离、测定。3.-2试剂和材料以下所用的试剂和水,除特别注明者外均为分析纯试剂,水为符合GB/T6682中规定的三级水。3.2.1甲醇:色谱纯,过0.45um滤膜。3.2.2乙腈:色谱纯,过0.45热m滤膜3.2.3提取液:0.5%偏磷酸溶液(14.29g偏磷酸溶解于水,并稀释至1L):甲醇=80:20。3.2.4氢氧化钠溶液c(NaOH)约2mol/L:20g氢氧化钠溶于250mL水中。3.2.5液液萃取用试剂 乙醚。无水硫酸钠。3.2.6氮气。3.2.7盐酸溶液c(HCL)约0.02mol/L:1.67mL盐酸用水定容至1L。3.2.8固相萃取(SPE)用试剂30mg/lccOasis?HLB固相萃取小柱或同等效果净化柱。1) Oasis?HLB固相萃取小柱是由 Waters Corperation (34 Maple Street Milford MA,USA)提供的产品的商品名称,给出这一信惠是为了给本行业标准的使用者提供方便,而不悬标准主管部门对这一产品的认可。2001-05-01实施中华人民共和国农业部2001-02-12批准307
NY 438-200SPE淋洗液.1淋洗液-1:含2%氨水的5%甲醇水溶液。.2淋洗液-2:含2%氨水的30%甲醇水溶液。3.2.9HPLC专用试剂HPLC流动相:1mL11磷酸(优级纯)用实验室二级水稀释至1-L,并按10012的比例和乙腈(3.2.2)混合,用前超声脱气5min。盐酸克仑特罗标准溶液.1储备液:200μg/mL:10.00mg盐酸克仑特罗(含C12H1gCl2N20:HCl不少于98.5%)溶于0.02mol/L盐酸溶液并定容至50mL,储于冰箱中。有效期1个月。.2工作液,2.00μg/mL:用微量移液器移取储备液500μL,以0.02mol/L盐酸溶液稀至50mL,储于冰箱中。.3标准系列:用微量移液器移取工作液(.2)25、50、100、500、1.000μL,以0.02mol/mL盐酸溶液稀释至2mL,该标准系列中盐酸克仑特罗的相应浓度分别为:0.025、0.050、0.100、0.500、1.00μg/mL,储于冰箱中。3.3仪器、设备3.3.1实验室常用仪器、设备。3.3.2分析天平:感量0. 000 1g感量0. 00001 g。3.3.3超声水浴。3.3.4离心机:能达4000 r/min。3.3.5分液斗:150mL。3.3.6日电热块或沙浴:可控制温度在(50士5)℃。3.3.7烘箱:温度可控制在(70士5)℃。3.3.8高效液相色谱仪:具有Cig柱4μm(如1
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