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现代分子生物学实验原理与技术 第一章 绪论第一节 基因操作技术1.基因操作技 术基因操作技术（重组DNA技术、基因工程）是在DNA水平上阐明生命现象的技术，包括DNA的“切”、“连”、“扩”等。“切”指限制性内切核酸酶切割DNA。“连”指用DNA连接酶连接两个DNA片段。“扩”是指目的DNA在宿主/载体系统中进行扩增。 2.实验方案（1）基因操作实验的主要目的有三个：①分离目的基因，获取DNA信息；②分析基因结构；③分析基因功能。（2）试验流程设计首先，应确定使用怎样的研究方案；其次，根据试验规模和研究室情况；最后，根据研究人员生活规律确定试验时间。 3.实验方法在设计实验方法时应考虑①能否达到实验目的；②是否符合实验室现状；③是否符合自己的喜好。确定实验方法时应考虑的因素实验目的经费预算爱好实验周期实验方法精度仪器性能速度准确性 4.实验遵循的原 则①忠于实验流程②关注实验要点④设平行对照实验⑤准确的试剂用量③准备充足的实验材料 ⑥数据整理注意：⑴第一次实验成功，第二次实验马虎。⑵实验精度：①必须严格按照实验流程进行的操作；②较严格的实验操作，允许5%的变动；③允许20%变动的实验操作；④不需要特别注意的实验操作。⑶酶促反应不顺利时，若加入更多的酶或DNA，结果会越来越糟。⑷不设平行对照实验往往是实验失败的原因。⑸样本标记的零乱也往往是实验失败的重要原因。 5.实验材料的准备?购买?利用公共服务机构?接受馈赠写求助信要注意：①你需要什么？②及时、真实的将相关信息告诉对方，不能隐瞒。③通常向论文通讯作者寻求帮助。④写信的稿纸是印有单位标志、名称、电话号码等信息的公函纸。 第二节 实验室规则与安全⒈实验室规则⑴保持肃静⑵保持整洁⑶严格操作⑷注意节约⑸保证安全⒉实验室常识⑴使用贵重仪器如分析天平、分光光度剂、离心机等倍加爱护，使用前熟知使用方法，使用时严格遵守操作规程，发生故障时，立即关机。⑵凡挥发性、有烟雾、有毒和有气味的实验，均应在通风柜内进行。 ⑶配制试剂时，应对试剂纯度、结构式、分子质量等特性熟悉，做到“有的放矢”。⑷量瓶是量器，不要用量瓶做容器。⑸洗净器皿应倒置架上，使其自然风干。⒊实验室安全⑴《实验室生物安全通用要求》查看⑵了解电闸、水阀煤气总阀门所在处，离开实验室检查是否关好。⑶使用电器设备时严防触电。⑷使用高温高压锅灭菌时不得离人。⑸使用可燃物，特别是易燃物，应特别小心。⑹凡使用腐蚀性试剂，必须谨慎操作，防止溅出。⑺废液特别是强酸强碱，应稀释后倒入水池。⑻有毒物品应按照实验室规定办理审批手续后方可领取，使用时严格操作，用后妥善处理。 ⒋实验室急救⑴触电①关闭电源；②用干木棍将导线与被害者分开；③将被害者移至木板上，与地面分离；④急救者必须做好触电安全措施，手脚必须绝缘。⑵火灾 隔绝氧气①起火物与水相容：水、湿布、沙土、灭火器等②起火物与水不相容：不可用水⑶烫伤 乙醇消毒，涂2%苦味酸或5%鞣酸，防感染⑷玻璃割伤或其他器械损伤清理伤口，硼酸水洗净，涂碘酒，包扎⑸灼伤皮肤①强碱：大量清水稀释，涂5%硼酸或2%乙酸②强酸、溴：大量清水稀释，5%NaHCO3或5%氨水⑹煤气中毒 呼吸新鲜空气 思考题：⒈什么是DNA重组技术？其实验的主要目的是 什么？答案⒉试分析有些人工作很辛苦，但总得不出理想实验结果的原因。答案⒊如何获得你需要的实验材料（特别是未商品化的材料）？答案⒋什么是《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）？据此生物学实验室可分几级？答案⒌实验室发生火灾时该如何处理？烫伤、灼伤时该如何处理？答案⒍如何处理对环境有污染的试剂？答案 第二章 仪器操作与溶液配制第一节 常用器皿与仪器1、塑料制品Eppendrof 管 2、微量移液器（枪）使用方法调节时，自大到小。由小值调到大值时，应多调1/3圈，再反调至设定值。 3、恒温水浴 锅多用于酶促反应，将Eppendrof管插入浮漂中进行反应。 4、小型离心机离心甩干是指短时间（1~3s）的离心操作，目的是使附着于管壁的液体沉入管底。 5、离心干燥机目的是使DNA样品快速干燥。 6、旋涡混合器利用不对称的旋转将管内液体混匀。 7、振荡器搅拌离心管内液体，加速难容物溶解，清洗浸泡于溶液中的不洁器皿。 8、真空 泵利用真空吸走液体，作用与离心干燥机或凝胶干燥机类似。 9、紫外发光装置防护板（贴有起保护作用的保鲜膜）过滤板紫外线可分为短波、中波、长波等类型，短波光线强，对DNA损伤大。实验室一般使用中波，使用时应戴上防护眼镜。因灯管和过滤板有使用寿命，用完后及时关闭。 10、一次性手套①防止危险试剂沾到手上。②防止试剂受到污染。11、纸巾吸走残余液体，一般卫生纸就可以。擦拭实验用品（如玻璃板）时，要用专用、不带毛屑的面巾纸。 第二节 溶液1、实验用水一蒸水：多用于大肠