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文件编号 产品初始污染菌检验操作规程 版本/修订 初始污染菌检验操作规程 文件编号： 版本： 编制/日期： 审核/日期： 批准/日期： 受控状态: 8批准 实施 1 目的 为了规范产品初始污染菌检验操作，编制本规程。 2 适用范围 本规程适用于产品初始污染菌检验操作。 3 职责 3.1 检验室负责对产品初始污染菌检验操作的取样和化验，并填写检验报告； 3.2 品管部经理负责签发检查报告。 4 工作程序（《中国药典》2020年版） 4.1 供试品数量 成品：灭菌前产品至少取3个单位以上。 4.2 供试液制备和接种 4.2.1 取样品至少10个，以无菌操作方法移入灭菌的50ml 0.9%NaCl震摇洗脱备用。 4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。另取1ml注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。 4.2.3 将熔化并冷却至45℃左右的大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）倾注于平皿内，每平皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，在37±1℃恒温培养48小时，观察结果。 4.3结果观察 4.3.1 先用肉眼观察计数菌落，然后再用5-10倍放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 4.3.2 首先选取平均菌落数在30—300之间的平板，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。 4.3.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在30—300之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均菌落数，若其比值大于2则报告其中较小的菌落数。 4.3.4 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.3.5 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.3.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300个之间，一个大于300个，另一个小于30个，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 4.3.7 若所有稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。 4.3.8 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告，大于100时采用两位有效数字，结合10的指数来表示。 4.3.9 在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。 4.4 结果计算： 产品带菌数=(平均菌数×稀释倍数）÷件次 4.5 产品初始污染菌数计算 产品初始污染菌数=产品带菌数×校正因子 4.6 正因子检测 4.6.1 校正因子采用反复洗脱方法，实验步骤如下： 4.6.1.1 取样品1件，投入10ml的无菌0.9%NaCl洗脱液中(A)。 4.6.1.2 样品的处理用手振荡80次。 4.6.1.3 注皿：取处理洗脱液（A）2ml，分别注入两个无菌平皿中，每平皿1ml。 4.6.1.4 再洗脱:将样品从洗脱液(A)中取出沥干，移入另一定量的无菌洗脱液中(B)。 4.6.1.5 再处理:将B洗脱液用手振荡80次。 4.6.1.6 再注皿:取B洗脱液2ml，分别注入两个无菌平皿内，每平皿lml。 （注：当微生物数少时,从B洗脱液开始，即可用无菌滤膜过滤后直接放培养基中培养。） 4.6.1.7 如此反复洗脱4次。即A、B、C和D，直至洗脱累积量(初始污染菌)不再增加，最后沥干样品，将其平铺于无菌平皿中(E)。然后将熔化并冷至45℃左右的NA培养基，分别注入A～E各平皿每皿15ml。 4.6.1.8 待凝固后，放置在规定的培养条件下(30～35℃，72h)培养，进行活菌计数。 4.6.1.9 同批产品，需抽取3-5件，进行重复性试验，确定平均回收率，填写《初始污染菌数验证测定试验记录表》。 4.6.2 校正因子计算： 回收率（%）=A菌落数/(A+B+C+D+E)菌落数 校正因子=1/平均回收率 4.6.3 校正因子每做一次 4.7 结果判断 4.7.1 产品初始污染菌数≤100cfu/件次。 4.7.2 产品初始污染菌的检测频次是每月对每个规格进行一次检测，填写《初始污染菌检测报告》，每半年对产品的初始污染菌